HL-60细胞DNA甲基化酶的纯化和性质 |
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引用本文: | 何忠效,王顺泰,姚知行,王秀奇.HL-60细胞DNA甲基化酶的纯化和性质[J].中国科学B辑,1993(5). |
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作者姓名: | 何忠效 王顺泰 姚知行 王秀奇 |
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作者单位: | 北京师范大学生物系,中国科学院生物大分子国家重点实验室,中国科学院生物大分子国家重点实验室,中国科学院生物大分子国家重点实验室 北京 100875 中国科学院生物大分子国家重点实验室 北京 100101,北京 100101,北京 100101,北京 100101 |
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摘 要: | 通过将HL-60细胞移植到裸鼠体内获得实体肿瘤。以此为材料确立了一个简便的提纯DNA甲基化酶程序,它包括:细胞的超声破碎、超离心、去核酸、硫酸铵盐析、DEAE-纤维素柱层析及Sephadex G100凝胶过滤。用梯度-PAGE得到一条电泳均一的区带,测得该酶的分子量为479kD,该酶的最适pH为8.2,对钾、钠离子敏感,对热不稳定;用L-B作图法测得其对底物S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(SAM)的K_m为2.94×10~(-5)mol/L;SAH是该酶的竞争性抑制剂。在1mmol/L S-腺苷酰-L-高丰胱氨酸(SAH)存在下,其K_i为4.17×10~(-4)mol/L,同时也测定了该酶对DNA底物的专一性及几种代谢相关物对该酶的调节作用。
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关 键 词: | HL-60细胞 DNA甲基化酶 柱层析 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳 |
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