| 赤松ISSR-PCR反应体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 娄虹,邢晓琳,赵曼琳,安娜,孟靖.赤松ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J].辽宁大学学报(自然科学版),2018(3). |
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| 作者姓名： | 娄虹 邢晓琳 赵曼琳 安娜 孟靖 |
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| 作者单位： | 辽宁大学生命科学院 |
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| 摘 要： | 为了建立赤松ISSR-PCR反应体系,利用正交试验分别对影响赤松PCR反应的dNTP浓度、Mg~(2+)浓度、Taq酶浓度、引物浓度、模板浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定引物的最佳退火温度和循环次数.最终确定赤松ISSR-PCR最佳反应体系及扩增条件为:25μL反应体系中含2.5μL 10×PCR Buffer、3 mmol·L~(-1)dNTP、1.5 mmol·L~(-1)Mg~(2+)、0.5 U Taq酶、0.3μmol·L~(-1)引物、9 ng模板;扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行94℃变性30 s,55℃退火45 s(退火温度随引物不同而变化),72℃延伸2 min,35个循环,最后72℃延伸7 min.这一ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR技术对赤松进行物种分类鉴定奠定了基础.
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