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| 大肠杆菌O157:H7微滴数字PCR定量方法的建立 | |
| 引用本文： | 董莲华,张玲,姜君,王江南,王晶,陈唯军.大肠杆菌O157:H7微滴数字PCR定量方法的建立[J].分析化学,2015(3):319-324. |
| 作者姓名： | 董莲华 张玲 姜君 王江南 王晶 陈唯军 |
| 作者单位： | 1. 中国计量科学研究院,北京,100029 2. 中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室,北京,100029 3. 北京市计量检测科学研究院 北京100029 |
| 基金项目： | 中国计量科学研究院基本科研业务费资助项目(Nos.AKY1323-14,AKY1408-14) |
| 摘 要： | 以大肠杆菌O157：H7(E. coli O157：H7)rfbE基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR( ddPCR)方法。对ddPCR反应中的探针浓度进行了优化,考察了方法的线性范围、精密度、定量限和检出限。最终确定ddPCR 反应中的最佳探针浓度为300 nmol/L。 E. coli O157：H7基因组 DNA 浓度范围为4~1.25×105拷贝/20μL ddPCR反应液时,ddPCR方法线性相关系数( R2)为0.999。当DNA浓度为760~88400拷贝/20μL 时,方法的精密度最好( RSD<5%)。本方法的定量限为4拷贝/20μL,检出限为3拷贝/20μL。特异性验证结果表明,建立的ddPCR方法特异性良好,对13份猪肉、牛肉和鸡肉样品的检测结果与定量PCR方法检出结果一致。 |
| 关 键 词： | 微滴数字聚合酶链式反应 大肠杆菌O157:H7 拷贝数 |
Development of Droplet Digital Polymerase Chain Reaction for Quantifying Escherichia Coli O157:H7 |
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| DONG Lian-Hua , ZHANG Ling , JING Jun , WANG Jiang-Nan , WANG Jing , CHEN Wei-Jun.Development of Droplet Digital Polymerase Chain Reaction for Quantifying Escherichia Coli O157:H7[J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2015(3):319-324. | |
| Authors: | DONG Lian-Hua ZHANG Ling JING Jun WANG Jiang-Nan WANG Jing CHEN Wei-Jun |
| Institution: | DONG Lian-Hua;ZHANG Ling;JING Jun;WANG Jiang-Nan;WANG Jing;CHEN Wei-Jun;National Institute of Metrology;Key Laboratory of Genome Sciences and Information,Beijing Institute of Genomics,Chinese Academy of Sciences;Beijing Institute of Metrology and Test; |
| Abstract: | |
| Keywords: | Droplet digital polymerase chain reaction Escherichia coli O157:H7 Copy number |
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