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| 用于高度降解mRNA样本的非反转录基因表达量测定方法 | |
| 引用本文： | 唐晓闻,李桂梅,邹秉杰,刘敏,周国华.用于高度降解mRNA样本的非反转录基因表达量测定方法[J].分析化学,2013,41(8):1165-1170. |
| 作者姓名： | 唐晓闻 李桂梅 邹秉杰 刘敏 周国华 |
| 作者单位： | 1. 南京医科大学基础医学院,南京210029;南京军区南京总医院药理科,南京210002 2. 中国人民解放军第八一医院病理科,南京,210002 3. 南京军区南京总医院药理科,南京,210002 4. 华东医学生物技术研究所,南京,210002 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省临床医学科技专项-新型临床诊疗技术攻关，军区医学科技创新经费 |
| 摘 要： | 许多生物样本(如石蜡包埋组织样本)中的mRNA易断裂为小片段,利用传统方法检测较困难。为了测定高度降解的mRNA,本研究针对待测mRNA短片段设计一对探针,当探针与待测模板杂交后,通过连接反应将两条探针5’与3’端相连,连接产物作为PCR扩增模板进行实时荧光定量检测,从而对待测mRNA进行定量测定。以人ACTB基因为待测靶标,通过测定不同浓度的待测靶标及与待测靶标序列不同的RNA片段,分别考察方法的灵敏度与特异性,并检测肺癌石蜡切片样本中ACTB基因的表达量,与传统的反转录定量PCR检测结果进行了对比。本方法的检出限为150 fmol/L,定量线性范围为150 fmol/L～300 pmol/L,并且具有良好的特异性。在对石蜡包埋组织样本中的基因表达量检测时,本方法扩增检测CT值比反转录实时定量PCR小,表明本方法更适合对高度降解的mRNA样本进行定量测定。 |
| 关 键 词： | 连接反应 基因表达量 高度降解RNA 实时荧光定量PCR 石蜡包埋组织样本 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ | |