| 应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶 |
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| 引用本文： | 李梓君,方柏山,杨仲丽,刘嘉.应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶[J].华侨大学学报(自然科学版),2010,31(6). |
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| 作者姓名： | 李梓君 方柏山 杨仲丽 刘嘉 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展(973)计划项目，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 经过连续易错聚合酶链式反应(Error-Prone PCR)向克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)甘油脱氢酶基因中引入突变,并构建突变文库.依据突变体催化番红O显色的特性,采用琼脂平板法和96微孔板法相结合的高通量筛选方法,成功获得突变体gldA-74,其酶活力是亲本重组酶的2.73倍.通过软件对突变体gldA-74酶基因和亲本重组酶基因进行分析对比,发现突变体gldA-74酶基因发生了一处点突变(A964T),该突变使一处氨基酸被取代.将亲本重组酶和进化酶的高效表达产物经Ni柱纯化后,酶学性质的测定结果表明,甘油的Km值由0.58 mmol.L-1升高至0.63 mmol.L-1,而NAD的Km值由0.74 mmol.L-1升高至0.77mmol.L-1,并且酶的最适pH值由原来的11.5升高至12.5,而最适温度由65℃降至55℃.
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| 关 键 词： | 甘油脱氢酶 克雷伯杆菌 定向进化 易错聚合酶链式反应 |
Directed Evolution of Glycerol Dehydrogenaseby Error Prone PCR |
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| LI Zi-jun,FANG Bai-shan,YANG Zhong-li,LIU Jia.Directed Evolution of Glycerol Dehydrogenaseby Error Prone PCR[J].Journal of Huaqiao University(Natural Science),2010,31(6). |
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| Authors: | LI Zi-jun FANG Bai-shan YANG Zhong-li LIU Jia |
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