青霉素酰化酶研究——Ⅰ.抑制作用,纯化和性质 |
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作者姓名: | 费俭 张斌骏 顾璆 |
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作者单位: | 华东化工学院生化工程研究所(费俭,张斌骏),华东化工学院生化工程研究所(顾璆) |
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摘 要: | 丙酮、乙醇和苯丙氨酸是大肠杆菌青霉素酰化酶的竞争性抑制剂,分别抑制模拟底物3-苯乙酰胺基6-硝基苯甲酸水解的活力。青霉素酰化酶粗酶液经硫酸铵盐析,pH5沉淀,SE-Sephadex C50层析,苯丙氨酸-Sepharose 4B疏水层析和DEAE-Sephadex A25层析可得纯酶,聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳呈现一条带,比活为27.5u/mg蛋白。纯化总活力回收率为28.1%。青霉素酰化酶分子量约为90000,有两个亚基,分子量分别为70000和20000,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,催化青霉素G水解的米氏常数为2.94mmol/L。
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关 键 词: | 青霉索G 抑制 提纯 疏水层析 酰化酶 |
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