| 基于克隆测序技术的人类白细胞抗原基因高分辨率分型方法的建立 |
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| 引用本文： | 邢晓清,初亚男,项铮,宋沁馨,周国华.基于克隆测序技术的人类白细胞抗原基因高分辨率分型方法的建立[J].分析化学,2014(11):1574-1579. |
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| 作者姓名： | 邢晓清 初亚男 项铮 宋沁馨 周国华 |
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| 作者单位： | 1. 药物质量与安全预警教育部重点实验室，中国药科大学，南京210009; 南京军区南京总医院药理科，南京210002
2. 南京军区南京总医院药理科,南京,210002 |
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| 基金项目： | 江苏省科技支撑计划社会发展项目，中国博士后科学基金面上项目，药物质量与安全预警教育部重点实验室资助项目，南京军区南京总医院院内课题 |
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| 摘 要： | 运用优化的扩增和克隆测序技术，建立了人类白细胞抗原( HLA-B)基因的高分辨率分型方法。针对HLA-B基因保守区序列设计引物进行等位基因扩增，基于质粒不相容原理将杂合型等位基因有效克隆入质粒DNA中，经细菌培养后进行Sanger测序，根据测序结果经ClustalX2软件分析和IMTG/HLA数据库的BLAST比对即可完成HLA-B基因的高分辨率分型。利用建立的方法对7例临床样本进行了HLA-B基因分型，并且与第三方直接碱基序列分析基因分型技术( PCR-SBT)进行比对，结果完全一致。本方法无需专业分型软件，准确度高，成本低；采用通用引物进行等位基因的扩增和测序，无需传统方法中繁琐的引物设计和过程优化，实现了HLA-B基因的高分辨率分型。
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| 关 键 词： | 人类白细胞抗原-B基因 克隆测序技术 Sanger测序 高分辨率基因分型 |
Establishment of Cloning and Sequencing Method for High-Resolution Human Leukocyte Antigen-B Genotype Assay |
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| XING Xiao-Qing
,
CHU Ya-Nan
,
XIANG Zheng
,
SONG Qin-Xin
,
ZHOU Guo-Hua.Establishment of Cloning and Sequencing Method for High-Resolution Human Leukocyte Antigen-B Genotype Assay[J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2014(11):1574-1579. |
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| Authors: | XING Xiao-Qing CHU Ya-Nan XIANG Zheng SONG Qin-Xin ZHOU Guo-Hua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human leukocyte antigen-B gene TA clone Sanger Sequencing High-resolution genotyping |
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