池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析 |
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引用本文: | 王诚远,胡芳琴,刘国凤,王军花,彭扣,盛军庆,洪一江.池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析[J].南昌大学学报(理科版),2014(2):161-165. |
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作者姓名: | 王诚远 胡芳琴 刘国凤 王军花 彭扣 盛军庆 洪一江 |
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作者单位: | 南昌大学生物科学系; |
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基金项目: | 江西省科技落地计划资助项目(KJLD12001);江西省科技星火计划资助项目(20123BBF61121);江西省自然科学基金资助项目(20122BAB204016);国家自然科学基金资助项目(31160534) |
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摘 要: | 筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。
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关 键 词: | 池蝶蚌 金属硫蛋白 原核表达 活性分析 |
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