褶纹冠蚌(Cristaria plicata)热休克蛋白70的原核表达及多克隆抗体制备 |
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引用本文: | 谢彦海,俞泽溪,文春根,胡宝庆.褶纹冠蚌(Cristaria plicata)热休克蛋白70的原核表达及多克隆抗体制备[J].南昌大学学报(理科版),2014,38(3):258-262. |
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作者姓名: | 谢彦海 俞泽溪 文春根 胡宝庆 |
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作者单位: | 南昌大学实验动物学部; 江西省水产科学研究所; 南昌大学生物科学系; |
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基金项目: | 国家自然基金资助项目(30960296);江西省自然基金资助项目(20122BAB204009) |
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摘 要: | 构建褶纹冠蚌热休克蛋白70基因的原核表达质粒pET30a-cpHSP70,并经酶切和DAN测序鉴定。将其转入到表达宿主BL21(DE3)菌中,用IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western-blot检测。结果显示:新表达的重组蛋白分子量约为74kD。在IPTG的诱导下,其表达量随时间的增加而增加,最适表达条件是37℃诱导8h。表达蛋白可溶性分析发现,一部分蛋白以不溶性的包涵体形式存在,一部分蛋白以可溶性蛋白形式存在。Westernblot检测显示蚌在35℃热激诱导1h后,其血、鳃、肌肉、肝胰腺和外套膜组织cpHSP70蛋白表达水平相对于蚌在20℃暂养3h后的表达量明显升高。
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关 键 词: |   褶纹冠蚌 热休克蛋白70 原核表达 多克隆抗体 |
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