高效液相色谱/荧光法测定血浆、红细胞与尿液中的硫胺素及其磷酸酯 |
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引用本文: | 董爱军,张英春,杨鑫,张华,井晶.高效液相色谱/荧光法测定血浆、红细胞与尿液中的硫胺素及其磷酸酯[J].分析测试学报,2014,33(8):934-939. |
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作者姓名: | 董爱军 张英春 杨鑫 张华 井晶 |
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作者单位: | 哈尔滨工业大学食品科学与工程学院 |
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摘 要: | 建立了同时测定血浆、红细胞、尿液中硫胺素(T)、一磷酸硫胺素(TMP)、二磷酸硫胺素(TDP)的柱前衍生/反相高效液相色谱-荧光检测法。样品经高氯酸除蛋白,铁氰化钾衍生后,采用反相色谱柱分离,荧光检测器测定,外标法定量。色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm i.d.),流动相为0.2 mol/L KH2PO4溶液(pH 7.0,含0.000 3 mol/L四丁基氢氧化铵)-甲醇和甲醇-水,采用梯度程序进行洗脱,流速为0.8mL/min。荧光检测器激发波长为365 nm,发射波长为435 nm。结果表明:T,TMP在0.5~20.0μg/L,TDP在5.0~200.0μg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数分别为0.99,0.98,0.99。T,TMP,TDP的平均回收率为86.8%~110.2%,相对标准偏差(RSDs)为2.5%~10.9%。3种化合物在血浆及红细胞中的检出限(LODs)为0.03~0.35μg/L,定量下限(LOQs)为0.09~1.18μg/L。T在尿液中的检出限(LODs)为1.58μg/L,定量下限(LOQs)为5.26μg/L。该方法的准确度和精密度均较高,能够满足临床检测和科研需要。
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关 键 词: | 反相高效液相色谱/荧光法 硫胺素及其磷酸酯 血浆 红细胞 尿液 |
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