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人肿瘤坏死因子(TNF)cDNA的分离、鉴定及其表达
作者姓名:肖蕾  田园  王秀琴  贾凤兰  李英  吴旻
作者单位:中国医学科学院肿瘤研究所,中国医学科学院肿瘤研究所,中国医学科学院肿瘤研究所,北京军区总医院肝病研究所,中国医学科学院肿瘤研究所,中国医学科学院肿瘤研究所 北京 100021,北京 100021,北京 100021,北京 100021,北京 100021
摘    要:PMA诱导的HL-60细胞株mRNA经逆转录合成cDNA;经过第一链cDNA为模板的PCR扩增反应,分离到一特异的615bp DNA片段。Southern杂交和DNA序列分析证实这一615bp片段包含了编码人TNF成熟肽所需的全部cDNA顺序。将这一人TNF cDNA克隆到大肠杆菌表达载体pKK223-3,获得人TNF直接表达质粒pHT-1。IPTG诱导的表达产物具有L-929细胞毒活性;并经抗体中和实验确证为人TNF。在A_(600)=2时,大肠杆菌产生的重组人TNF含量约为8×10~7U/1培养液。

关 键 词:人肿瘤坏死因子(hTNF)  多聚酶链反应(PCR)  基因克隆  基因表达  大肠杆菌
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