| 转β-甘露聚糖酶基因大肠杆菌在猪肠道内的外泌型表达 |
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| 引用本文： | 王和平,王龙,文静,高宏斌,范文斌.转β-甘露聚糖酶基因大肠杆菌在猪肠道内的外泌型表达[J].内蒙古大学学报(自然科学版),2006,37(1):58-64. |
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| 作者姓名： | 王和平 王龙 文静 高宏斌 范文斌 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学生物工程学院,呼和浩特,010018 |
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| 摘 要： | 从里氏木霉R u t C-30提取总RNA,用RT-PCR方法克隆到β-甘露聚糖酶成熟肽cD-NA,并将其E coRΙ和B amH I酶切后连接到克隆载体pGEM进行测序,结果与G enB ank公布的完全一致,随后将含有β-甘露聚糖酶基因的重组质粒pGEM-M anΙ经E coRΙ、绿豆芽核酸酶、H indⅢ酶切处理和纯化后,与含有Ω序列和T 7启动子以及信号肽Om pT序列的分泌型表达载体pTOO 2连接,构建成表达载体pTOO 2-M an.Ι然后利用大肠杆菌素释放基因(k il)能有效的增加细菌外膜通透性促进周质蛋白外泌的原理,再将表达载体pTOO 2-M anΙ和质粒pUC 18-k il共转化到大肠杆菌BL 21株中,构建成外泌型表达体系BL 21-pTOO 2-M anΙ/pUC 18-k il进行外泌型表达.表达产物经酶活鉴定具有明显的β-甘露聚糖酶活性,经EL ISA双抗夹心法检测,无论在体外或猪肠道内容物内均为阳性,从而实现了该基因的外泌型表达;表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,分子量为50.98 kD和53.98 kD,该工程菌通过瘘管灌注到猪肠道内进行表达研究,结果基本令人满意.从而实现了该转基因大肠杆菌在猪肠道中外泌型表达的目的.
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| 关 键 词： | 外分泌型表达 β-甘露聚糖酶 |
| 文章编号： | 1000-1638(2006)01-0058-07 |
| 收稿时间： | 2004-09-15 |
| 修稿时间： | 2005-11-01 |
External Secretion of β-Mannase by Transgenic E.coli in Intestine of Swines |
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| WANG He-ping,WANG Long,WEN Jing,GAO Hong-bin,FAN Wen-bin.External Secretion of β-Mannase by Transgenic E.coli in Intestine of Swines[J].Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Neimongol,2006,37(1):58-64. |
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| Authors: | WANG He-ping WANG Long WEN Jing GAO Hong-bin FAN Wen-bin |
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| Institution: | College of Bioengineering, NeiMongol Agricultural University, Hohhot 010018, PRC |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RT-PCR |
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