Die quantitative Gas-Chromatographie der Neutralzucker von Glykosaminoglykan-Peptiden

Zusammenfassung Neuere Untersuchungen haben ergeben, daß die Glykosaminoglykan-Proteine Neutralzucker enthalten, welche strukturell die Verbindung zwischen den Polysacchariden und dem Proteinanteil herstellen. Mit Hilfe der Gas-Chromatographie gelingt es, die Neutralzucker spezifischer und genauer als mit den üblichen colorimetrischen Verfahren zu bestimmen. Die Methodik erfordert die vorherige Abtrennung der Uronsäuren, Hexosamine und Aminosäuren nach 16 stündiger Hydrolyse in 0,2 N HCl unter Zusatz von 10% (w/v) Dowex 50 W bei 100° C. Die gas-chromatographische Trennung erfolgt in der Form ihrer Trimethylsilyläther. Mit dieser Methodik wurde in verschiedenen chromatographisch reinen Glykosaminoglykan-Peptiden: Keratansulfat-Peptid aus Cornea und Trachea, Chondroitin-4-sulfat-Peptid aus Cornea und Trachea, Chondroitin-6-sulfat-Peptid aus Trachea, der Neutralzuckergehalt bestimmt. Bei der alkalischen -Elimination von Chondroitinsulfat-Peptiden in Gegenwart von Natriumborhydrid entsteht aus der Xylose Xylit, welches nach Hydrolyse als Trimethylsilyläther gas-chromatographisch nachgewiesen werden kann. Auf Grund der vorhandenen analytischen Ergebnisse wird die Rolle der Neutralzucker bei der Verknüpfung der Polysaccharidkette mit der Peptidkette diskutiert.

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Quantitative gas chromatography of the neutral sugars of glycosaminoglycan-proteins

Recent studies have shown that glycosaminoglycan-proteins contain neutral sugars, which structurally form the linkage between the polysaccharide and the protein part. By means of gas-liquid chromatography it is possible to determine the neutral sugar content more specifically and more exactly than by the usual colorimetric methods. Our method requires the removal of the uronic acids, hexosamines, and amino acids after hydrolysis for 16 hours at 100° C with 0.2 N hydrochloric acid and addition of 10% (w/v) Dowex 50 W. The gas-chromatographic separation of the neutral sugars is achieved in form of their trimethylsilyl derivatives. By this method the neutral sugar content of several chromatographically pure glycosaminoglycan peptides: keratansulphate peptide from bovine cornea and trachea, chondroitin-4-sulphate peptide from bovine cornea and trachea, and chondroitin-6-sulphate from bovine trachea, has been determined. On alkaline -elimination in the presence of NaBH₄ of chondroitinsulphate peptides xylitol is formed from xylose which after hydrolysis can be identified by gas chromatography. On the basis of the analytical results the role of the neutral sugars in the linkage of the polysaccharide chain to the peptide chain is discussed.