基于DNA “Y”型结构的指数型核酸恒温扩增策略检测microRNA

该文基于“Y”型DNA模板和恒温指数扩增反应(EXPAR)技术的信号放大功能，建立了一种快速低序列依赖性的miRNA检测方法(Y-EXPAR)。以let-7b为检测目标，设计两条部分互补的DNA模板，与目标miRNA共同构成“Y”型结构，能够同时进行双向扩增，反应效率高，反应时间短，并降低了放大性能对模板序列的依赖。方法检出限低至0.3 amol/L(相当于10 μL溶液中有1.8拷贝的let-7b)，并能区分单碱基差异的let-7家族同源序列。应用于肿瘤细胞裂解液let-7b的检测，POI值与细胞数目对数值呈线性关系，说明Y-EXPAR在实际样品miRNA的检测中具有优势。得益于扩增的高特异性、抗干扰性和低序列依赖性，该方法为miRNA的快速检测提供了新思路，在miRNA相关的疾病研究和临床诊断方面具有良好应用前景。