| 基于适配体的羧酸酯酶2A生化传感器的设计及应用研究 |
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| 作者姓名： | 陈悦 关晓青 王亦男 何青青 王丹丹 邹立伟 汤庆丰 葛广波 |
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| 作者单位： | 1. 上海中医药大学交叉科学研究院;2. 上海中医药大学附属普陀医院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(No.2017YFC1700202)；;国家自然科学基金项目(Nos.81773687,81922070,81903576)； |
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| 摘 要： | 基于RNA适配体与3,5-二氟-4-羟基亚苄基咪唑啉酮(DFHBI)复合物的荧光特性,结合羧酸酯酶2A (CES2A)的底物偏好性,采用计算机虚拟筛选和实验相结合的策略设计,研发了一种CES2A新型生化传感器。首先,以DFHBI为母核,借助计算机虚拟筛选技术预测了系列DFHBI羧酸酯类衍生物作为CES2A候选底物的潜力。其次,对排名前三位的潜在底物进行合成,并对其化学稳定性和特异性进行了评价,发现3,5-二氟-4-羟基亚苄基咪唑啉酮苯甲酸酯(Ph-DFHBI)对目标酶CES2A显示出极高的特异性和灵敏度。进一步借助同工酶水解实验发现,Ph-DFHBI仅可被CES2A特异性水解,并释放出DFHBI,而人体分布的其它高丰度水解酶(羧酸酯酶1A(CES1A)、乙酰胆碱酯酶(BchE)、丁酰胆碱酯酶(AchE)等)难以水解Ph-DFHBI。进一步在重组单酶和肝组织制备物中考察了CES2A-水解Ph-DFHBI的酶促反应动力学。在生理条件(pH 7.4, 37℃)下,CES2A介导的Ph-DFHBI水解反应显示出极高的亲和力和较快的反应速率,Km=0.66μmol/L,V<...
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| 关 键 词： | 适配体 3,5-二氟-4-羟基亚苄基咪唑啉酮 荧光生化传感器 羧酸酯酶2A 高通量筛选 |
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