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| 植酸酶基因表达与调控机制研究(Ⅱ)──番茄幼苗cDNA文库构建与植酸酶基因筛选 | |
| 作者姓名： | 李明刚 刘迅 张敏 龚雪琴 郝亚桓 姬生健 |
| 作者单位： | 烟台大学生物化学系，北京大学生命科学学院 |
| 摘 要： | 采用异硫氰酸胍法从发芽３～４ｄ的番茄幼苗中提取出总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离纯化ｍＲＮＡ．以ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物用逆转录法合成双链ｃＤＮＡ．将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ接头连接后克隆到表达载体λｇｔ１１的单一ＥｃｏＲＩ位点，经体外包装后感染宿主菌Ｙ１０９０，成功地构建了完整的番茄幼苗ｃＤＮＡ文库．用颜色筛选法筛选重组子，然后用植酸酶抗体做探针进行免疫筛选，得到两个阳性克隆．挑取阳性克隆噬菌斑扩增后纯化ＤＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，显示确有外源ＤＮＡ存在．该插入片断序列测定正在进行． |
| 关 键 词： | 番茄 植酸酶 cDNA文库 克隆 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |