盘电泳凝胶的蛋白酶贴印酶谱显示法

本法是在Ronald C.Roberts(1980)酶谱方法的基础上发展的,先在盘电泳凝胶上分离样品,再在载玻片琼脂糖平板上显示酶谱.我们用此方法来显示枯草杆菌商品酶粉的蛋白酶酶谱.蛋白酶样品经离心、透析后,先作盘电泳分离,电泳毕凝胶直接(或先浸在适当缓冲液中改变凝胶pH)与含酪素的琼脂糖平板贴在一起保温,使凝胶中的蛋白酶水解酪素,平板经固定、染色、脱色处理后,酪素未水解部分被染成蓝色背景,把无色的水解区域作为酶带衬托出来.还与在电泳凝胶上直接显示蛋白酶酶谱的方法作了比较.此外,以贴印法显示的各种酶谱,也存在着酶反应pH与电泳凝胶pH不一致的共同问题,对已有的改变凝胶pH的方法作了较为详细的检查,发现有的不能达到预期的结果,对此提出了相应的措施.