Protein-Mapping, Schnell-Dialyse und Molekulargewichtsbestimmung im Mikrogramm-Bereich

Zusammenfassung Zur Charakterisierung und Isolierung von Proteinen wird eine Elektrofokussierung in Ampholine in einem rechteckigen Gelstab und anschließend eine Elektrophorese in einem 16 mm dicken Gelblock durchgeführt. In beiden Fällen dient Polyacrylamid als Träger. Zur Identifizierung der erhaltenen Proteinflecke wird von dem Block eine 2 mm-Scheibe abgeschnitten, auf Proteine oder Enzyme angefärbt und auf den noch ungefärbten Restblock aufgelegt. Die markierten Flecke werden ausgeschnitten, extrahiert und für die Molekulargewichtsbestimmung und weitere Charakterisierung in einer besonderen Mikroapparatur gegen dodecylsulfathaltige Puffer dialysiert.

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Protein mapping, rapid dialysis and determination of molecular weights in the g-range

For the characterization of protein mixtures and isolation of proteins, first electrofocusing in Ampholines is performed in a rectangular rod followed by electrophoresis into a slab of 16 mm thickness. In both cases, polyacrylamide is used as carrier. For the identification of the spots, a sheet 2 mm thick is sliced from the slab, stained for proteins or enzymes and layered on top of the remaining gel. The spots under investigation are cut out, extracted and dialyzed in a specially designed micro apparatus against buffer containing sodium dodecyl-sulphate for molecular weight determination and further characterization.

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Ich danke sehr Fräulein H. Francksen, B. Kaerger und Frau U. Sunder-Plassmann für ihre Mitarbeit, für die Anfertigung der Plexiglasgeräte besonders Herrn Wieczorek, der Deutschen Forschungsgemeinschaft für eine Sachbeihilfe.