| Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸 |
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| 引用本文： | 朱龙宝,陶玉贵,葛飞,李婉珍,刘义,堵国成.Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸[J].高等学校化学学报,2017,38(2). |
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| 作者姓名： | 朱龙宝 陶玉贵 葛飞 李婉珍 刘义 堵国成 |
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| 作者单位： | 1. 安徽工程大学生物与化学工程学院,芜湖,241000;2. 西华大学食品与生物工程学院,成都,610039;3. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，安徽省高校自然科学基金(批准号:KJ2016A801)资助.?Supported by the National Natural Science Foundation of China，the Natural Science Fund for Colleges and Universities in Anhui Province |
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| 摘 要： | 克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(Sm PAM)基因,并进行异源表达,制备了重组Sm PAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码Sm PAM的结构基因pam,与表达载体p ET28a连接,构建重组表达质粒p ET28a-pam,转入E.coli BL21中表达,采用亲和层析柱分离纯化重组酶Sm PAM.结果表明,克隆得到编码523个氨基酸长度的Sm PAM基因pam,并在大肠杆菌中实现了高效表达,制得电泳纯的重组Sm PAM.该酶在最适温度30℃,p H=9.0条件下活力达到2.5 U/mg,具有较高的热稳定性和p H稳定性,在60~70℃下保持3 h未见活性下降,在p H=9~11保持24 h,残余酶活力达到98%.Sm PAM具有较宽的底物谱,可催化苯环上携带不同基团的3-芳香丙烯酸合成β-芳香丙氨酸,当苯环上携带吸电子基团时催化反应更易完成,其中2-硝基-β-苯丙氨酸的产率最高,达到93%.
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| 关 键 词： | 苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸 基因克隆 异源表达 |
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