Determination of furosine as a measure for irreversibly bound glucose in human fibrinogen

Summary An analytical procedure is presented which enables for the determination of irreversibly, nonenzymatic glycation of fibrinogen isolated from human blood. The method is based on determination of furosine, which is formed during hydrolysis of Amadori-products. For validation of the worked out furosine assay, synthesis of N-formyl-N-(desoxy-1-D-fructosyl-1)-Llysine as a model substance and furosine as a calibration standard were necessary. Several hydrolysis experiments showed the extent of furosine formation from fructosyllysine and from human fibrinogen. The increase of fibrinogen glycation by incubation withD-glucose could also be confirmed according to the literature. Using well-known techniques for sampling, work up and in performing reduction and hydrolysis steps, quantitative determination of furosine by high-performance liquid chromatography is possible. By application of the analytical assay, the extent of glycation of human fibrinogen can be analyzed with good precision. Calibration is performed by means of a prepared furosine standard. The practical handling of the method is shown.

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Bestimmung von Furosin als Maß für irreversibel gebundene Glucose in Human-Fibrinogen

Zusammenfassung In der vorliegenden Arbeit wird ein Analysenverfahren vorgestellt, das eine Bestimmung der irreversiblen, nichtenzymatischen Glucosylierung von Fibrinogen aus menschlichem Blut ermöglicht. Die Methode beruht auf der Bestimmung von Furosin, welches während der Hydrolyse von Amadori-Produkten gebildet wird. Für die Validierung der erarbeiteten Furosin-Methode waren die Synthese von N-Formyl-N-(desoxy-1-D-fructosyl-1)-L-lysin als Modell und von Furosin als Eichstandard erforderlich. In Hydrolyseversuchen wurde das Ausmaß der Furosinbildung aus Fructoselysin und Fibrinogen untersucht. In Übereinstimmung mit der Literatur wurde gezeigt, daß es möglich ist, den Glucosylierungsgrad von Fibrinogen durch In-vitro-Inkubation mitD-Glucose zu erhöhen. Die Fibrinogengewinnung aus Blut erfolgte mit bekannten Techniken der Probenahme und Aufarbeitung. Durch Reduktions- (Reaktionsblindwert) und Hydrolyseschritte ist es möglich, Furosin flüssigkeitschromatographisch (UV-Detektion) quantitativ zu erfassen. Durch Anwendung dieses Analysenverfahrens kann das Ausmaß der Glucosylierung von menschlichem Fibrinogen mit guter Reproduzierbarkeit vergleichend erfaßt werden. Die Kalibrierung erfolgt gegen den synthetisierten Furosinstandard. Die praktische Durchführbarkeit wurde gezeigt.