荧光光谱法的卤酸脱卤酶活性全细胞检测

卤酸脱卤酶能够降解对环境具有危害性的卤代羧酸类化合物，并且其具有立体选择性，可以拆分出纯手性的卤代羧酸，在环境保护和化学合成领域具有潜在的应用价值。建立卤酸脱卤酶活性的分析方法具有重要意义。催化性能较好的卤酸脱卤酶DehE在弱碱性范围内(pH 8.00～9.50)能催化2-氯丙酸发生脱卤反应产生氢离子，从而改变弱缓冲能力反应体系的pH,而某些物质的荧光强度受溶液pH影响较大。进行了荧光-pH指示剂的筛选，并以此建立了基于荧光光谱法的卤酸脱卤酶活性全细胞检测方法。结果表明：筛选出的荧光-pH指示剂2-萘酚-6,8-二磺酸二钾能够灵敏地反映弱碱性范围内(pH 8.00～9.50)的pH变化。所建方法在20 mmol·L^-1的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、 pH 8.50、 45℃、 45 mmol·L^-1的2-氯丙酸条件下检测效果最好，并且能避免假阳性结果的出现。当被检测的菌液OD₆₀₀=2.0时，15 min即可出现50%的荧光变化。采用HPLC验证了方法的专属性。该方法能够快速、简单、灵敏地在全细胞水平上检测卤酸脱卤酶活性。当微...