基于蛋白质组学的细胞色素P450和葡萄糖醛酸转移酶亚型绝对定量分析 |
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引用本文: | 刘喜东,朱俊,丛宇婷,胡良海,叶明亮,顾景凯,邹汉法.基于蛋白质组学的细胞色素P450和葡萄糖醛酸转移酶亚型绝对定量分析[J].分析化学,2014(1):10-15. |
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作者姓名: | 刘喜东 朱俊 丛宇婷 胡良海 叶明亮 顾景凯 邹汉法 |
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作者单位: | 吉林大学生命科学学院;中国科学院大连化学物理研究所;中国科学院分离分析化学重点实验室; |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(No.21105036);教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-12-0234)项目资助~~ |
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摘 要: | 利用蛋白质组学方法,将大鼠肝微粒体样品进行胰蛋白酶水解;再利用液相色谱-串联质谱法(LCMS/MS),采用多反应监测模式(MRM),通过测定蛋白质水解后产生的特征酶切肽段,实现同时对大鼠肝微粒体内药物代谢酶P450和UGT的绝对定量。本实验首先建立标准工作曲线,对肝微粒体样品中P450和UGT进行定量,在线性范围内,相关系数r>0.995,线性关系良好,定量限≤10 nmol/L;以合成的稳定同位素标记特征肽段作为内标,对UGT1A1进行定量分析。结果表明,同位素标记特征肽段与未标记肽段色谱行为与质谱响应一致,在基质溶液中同位素标记肽段线性关系良好,利用标准曲线法和稳定同位素稀释法测得UGT1A1含量分别为17.30和18.23 nmol/g,两种方法所得结果基本一致,但稳定同位素稀释法操作简便,更适用于复杂样品的高通量测定。
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关 键 词: | 葡萄糖醛酸转移酶 多反应监测 肝微粒体 细胞色素P450 气相色谱-串联质谱 |
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