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| 高效切割Hipp11 敲入位点的sgRNA 设计及活性验证 | |
| 引用本文： | 吴曦,周舒雅,刘甦苏,谷文达,左琴,李保文,贺争鸣,范昌发.高效切割Hipp11 敲入位点的sgRNA 设计及活性验证[J].实验动物科学,2015,32(5):26-30. |
| 作者姓名： | 吴曦 周舒雅 刘甦苏 谷文达 左琴 李保文 贺争鸣 范昌发 |
| 基金项目： | 基金项目: 中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金( No． 2014C3) ，国家青年自然基金( No． 81502396) |
| 摘 要： | 摘要: 目的设计并验证能够高效切割Hipp11 位点的sgRNA，为在Hipp11 位点定点敲入外源基因提供工作基础。方法使用预测软件对Hipp11 位点的sgRNA 进行预测并挑选脱靶效应较低的两个sgRNA。构建相应载体，通过CRISPR/Cas9 活性检测试剂盒在体外检测sgRNA 的活性。选取活性较高的sgRNA 体外转录，与Cas9 mRNA 一并注射受精卵。检测出生后小鼠Hipp11 位点切割效率，计算出sgRNA 的体内活性。结果两个sgRNA 的体外活性分别为19. 2%和51. 7%，使用体外活性高的2 号sgRNA 显微注射获得8 只新生小鼠，其中62. 5% ( 5 /8) 的小鼠中检测到Hipp11 位点周围发生碱基插入或缺失。结论获得一个能够引导高效切割的Hipp11 位点通用型sgRNA，从而为基因CRISPR 技术在Hipp11 位点定点插入外源基因奠定基础。sgRNA 体外活性能够预测sgRNA 在体内的切割活性，表明体外活性验证是筛选高活性sgRNA 的有效手段。 |
| 关 键 词： | < p> 基因定点插入 Hipp11 位点 CRISPR/Cas9 sgRNA 活性验证< /p> |
Designation and Activity Verification of High Efficiency sgRNAs for Hipp11 Locus |
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| Abstract: | |
| Keywords: | gene knock-in Hipp11 locus CRISPR/Cas9 sgRNA activity verification |
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