分子对接法和光谱法研究BRCA1846-871及其五突变肽与RAD51181-200相互作用

影响RAD51蛋白的修复功能,可有效改善肿瘤细胞对化疗药物的耐受性。利用计算机模拟BRCA1~(846-871)关键肽段五个活性位点的突变,通过分子对接法筛选出与RAD51~(181-200)相互作用较强的9条五突变肽。采用固相合成法合成目标多肽,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术分离、纯化得到纯度大于93%的纯品肽,电喷雾电离质谱(ESI-MS)技术进行表征。通过荧光光谱法和圆二色光谱法(CD)研究BRCA1~(846-871)及其五突变肽与RAD51~(181-200)的相互作用。荧光谱图显示,除P6外,其余配体均与受体RAD51~(181-200)发生静态猝灭。在室温下,P1 (4.17×10~4 L·mol~(-1))、P4 (7.61×10~4 L·mol~(-1))和P5 (1.19×10~4 L·mol~(-1))与受体RAD51~(181-200)结合较强。圆二色光谱图显示,P1、P4和P5使受体RAD51~(181-200)的α-螺旋结构含量降低非常明显,从60.5%分别下降为35.7%、36.3%和36.4%,BRCA1~(846-871)、P3、P6和P9对受体α-螺旋结构含量影响较小,从60.5%分别下降为56.3%、55.6%、55.6%和54.6%,而P2、P7和P8对受体α-螺旋结构含量几乎不产生影响。综合光谱分析结果可知,配体P4与受体RAD51~(181-200)的相互作用最强。