基于超滤离心前处理的液相色谱-串联质谱法手性拆分人血浆中的亚叶酸和5-甲基四氢叶酸非对映异构体及其药代动力学应用

建立了液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）同时测定人血浆中的亚叶酸和5-甲基四氢叶酸两对非对映异构体的方法。血浆经蛋白质沉淀-超滤离心处理后,以甲氨蝶呤为内标,乙腈-10 mmol/L pH 8.0醋酸铵为流动相,通过手性HSA色谱柱（150 mm×4 mm,5 μm）进行梯度洗脱。亚叶酸非对映异构体在25~5000 μg/L范围内、5-甲基四氢叶酸非对映异构体在12.5~2500 μg/L范围内,线性关系均良好。本方法在灵敏度、精密度、准确度、基质效应、提取回收率、稳定性等方面均得到充分验证,并成功应用于125 mg/m²亚叶酸和62.5 mg/m²左旋亚叶酸的药代动力学研究。结果显示：在125 mg/m²亚叶酸剂量组,左亚叶酸和左旋-5-甲基四氢叶酸的血浆峰浓度（C_max）为（3137.917±408.837）和（1679.633±244.132）μg/L,从时间点0到最后可定量时间点的药物代谢动力学时间曲线下面积（AUC_0-t）为（7504.883±1185.101）和（14001.214±2868.949）μg/L;在62.5 mg/m²左亚叶酸剂量组,左亚叶酸和左旋-5-甲基四氢叶酸的C_max为（3187.917±387.298）和（1739.204±224.755）μg/L,AUC_0-t为（7426.664±854.825）和（14884.331±1843.353）μg/L。两剂量组主要药物代谢动力学参数均无显著差异,特征一致,吸收的速度和程度一致,能够为后期进行左亚叶酸钠生物等效性研究提供技术支持。