| 绿色木霉BGL Ⅰ基因在酿酒酵母中的克隆表达及其纤维素乙醇发酵 |
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| 引用本文： | 刘泽寰,唐根云,全艳彩,龚映雪,肖文娟,王峻梅.绿色木霉BGL Ⅰ基因在酿酒酵母中的克隆表达及其纤维素乙醇发酵[J].兰州大学学报(自然科学版),2009,45(3). |
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| 作者姓名： | 刘泽寰 唐根云 全艳彩 龚映雪 肖文娟 王峻梅 |
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| 作者单位： | 暨南大学生命与健康工程研究院分子生物研究中心,广州,510632 |
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| 基金项目： | 教育部新世纪优秀人才支持计划，广东省科技计划项目，珠海市科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 采用反转录PCR方法从绿色木霉AS3.3711的总mRNA中获得了编码β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGL Ⅰ)的基因bgl1.序列测定表明该基因片段长2235 bp,编码744个氨基酸残基,与里氏木霉的bgl1序列完全相同.将其插入高拷贝数整合型表达载体PScIKP,构建了重组质粒PScIKP-bgl1.线性化后转化工业酿酒酵母AS2.489菌株,利用高浓度G418筛选高抗转化子,经SDS-PAGE蛋白电泳证明获得了能高效稳定分泌表达重组BGL Ⅰ的转化子.重组BGL Ⅰ酶能直接水解培养液中的纤维二糖,在84 h测得酶活最大值为0.978 u/mL.重组BGL Ⅰ酶最佳反应温度为60℃,最适反应pH为4.0～5.0,并且能以纤维二糖为惟一碳源发酵乙醇,发酵90h能够用重铬酸钾氧化比色法检测到乙醇的体积分数为0.51%.结果表明:成功克隆并在酿酒酵母中表达了一种高活性的β-葡萄糖苷酶,对于工业上直接利用纤维素为惟一碳源发酵生产乙醇的研究有重要意义.
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| 关 键 词： | 绿色木霉 β-葡萄糖苷酶Ⅰ 酿酒酵母 表达 乙醇 |
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