| 超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质 |
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| 引用本文： | 李雅萍,李友元,周新文,陈长华,张嗣良,杨原. 超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质[J]. 分析化学, 2010, 38(5). DOI: 10.3724/SP.J.1096.2010.00663 |
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| 作者姓名： | 李雅萍 李友元 周新文 陈长华 张嗣良 杨原 |
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| 作者单位： | 1. 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237
2. 复旦大学生物医学研究院,上海,200032 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划，生物反应器工程国家重点实验室专项经费 |
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| 摘 要： | 建立了一个超声功率-超声时间的安全区域,在此范围内进行超声波辅助酶解时,能避免超声波随机断裂蛋白质;在此安全区域内采用响应面法获得最佳超声功率和超声时间.建立了超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质的方法,将蛋白质依次进行10 min超声波浴辅助Urea-Free还原烷基化反应、90 ℃热变性15 min, 超声波辅助胰蛋白酶酶解15 s.应用此快速酶解方法鉴定3种典型标准蛋白质(牛血清白蛋白、细胞色素C和肌红蛋白),在25 min内达到与传统整夜酶解方法相同的鉴定结果,并获得更高的序列覆盖率.
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| 关 键 词： | 超声波辅助 热变性 蛋白质 酶解 质谱 |
Ultrasound-assisted Urea-Free Chemical Denaturants Combined with Thermal Denaturation to Accelerate Enzymatic Proteolysis |
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| LI Ya-Ping,LI You-Yuan,ZHOU Xin-Wen,CHEN Chang-Hua,ZHANG Si-Liang,YANG Peng-Yuan. Ultrasound-assisted Urea-Free Chemical Denaturants Combined with Thermal Denaturation to Accelerate Enzymatic Proteolysis[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2010, 38(5). DOI: 10.3724/SP.J.1096.2010.00663 |
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| Authors: | LI Ya-Ping LI You-Yuan ZHOU Xin-Wen CHEN Chang-Hua ZHANG Si-Liang YANG Peng-Yuan |
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