溶剂萃取分离-高效液相色谱-串联质谱法测定对虾中12种抗生素的残留量

将对虾先经冷冻干燥,再用球磨机碾碎制成粉末状分析样品。取此样品1.00g,用体积比为1∶4的加有0.1mol·L~(-1) Na2EDTA的Mcllvaine缓冲溶液(pH 4.00±0.05)-乙腈混合液每次10mL,超声提取3次,将样品中的12种抗生素(包括5种磺胺类、2种喹诺酮类、2种大环内脂类、3种四环素类)溶入提取液中。将3次提取液合并,并加入经乙腈饱和的正己烷20mL,充分振荡使可能带入提取液中的脂类杂质溶于正己烷中,离心分层后将上层正己烷取出并弃去。将下层溶液在40℃时蒸发至其体积不变,加水将溶液稀释至200mL,此时溶液中所含有机溶剂不应超过5%(体积分数),以免其在后续固相萃取(SPE)分离中穿透SPE柱而导致被测物流失。将上述200mL溶液以1.0～1.5mL·min~(-1)的流量通过经活化的CNWBOND LC-C18小柱进行净化,待溶液全部通过,用5%(体积分数)甲醇溶液5mL淋洗小柱,弃去全部流出液。将SPE小柱负压抽干,用甲醇6mL将被测物从小柱上洗脱,所得洗脱液用吹氮蒸至近干,用甲醇溶解残渣并定容至1.0mL。此溶液经0.22μm针式过滤器过滤,取滤液按仪器工作条件进行分析。选择ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱为分离柱,用不同体积的(A)1%(体积分数)乙酸溶液和(B)甲醇组成的混合液作为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾(ESI)离子源并在多反应监测(MRM)模式下按不同的保留时间测得了所测定的12种药物的峰面积。此12种药物标准曲线的线性范围均为1～100μg·L~(-1),其检出限(3S/N)为0.52～3.02ng·g~(-1)。加标回收试验给出的回收率为70.2%～102%,测定值的相对标准偏差(n=5)均小于14%。