| 2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数 |
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| 引用本文： | 胡玥,王雪娇,李恒,高文运.2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数[J].分析化学,2012(12):1859-1864. |
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| 作者姓名： | 胡玥 王雪娇 李恒 高文运 |
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| 作者单位： | 西北大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.21172179);西北大学研究生创新基金(No.10YYB02)资助 |
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| 摘 要： | 利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数。酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物1-脱氧-D-木酮糖,然后与2,4-二硝基苯肼衍生成腙。衍生化反应的适宜条件为:HClO4浓度为1.5%,反应温度37℃,反应时间60 min,2,4-二硝基苯肼与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩尔比为6∶1。色谱条件:0～17 min,40%～80%甲醇;18～20 min,40%甲醇。结果表明,本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的检出限为1.0 mg/L,在0.005～1.0 g/L范围内线性相关系数为0.999,相对标准偏差小于5.0%(n=3),标准回收率为102.22%。用本方法测得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数Km、Vmax和Kcat与文献报道一致。
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| 关 键 词： | 非甲羟戊酸途径 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶 动力学参数 2 4-二硝基苯肼 高效液相色谱法 |
Determination of Steady-State Kinetic Parameters of 1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate Synthase by Pre-column Derivatization High Performance Liquid Chromatography Using 2,4-Dinitrophenylhydrazine as Derivative Reagent |
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| HU Yue,WANG Xue-Jiao,LI Heng,GAO Wen-Yun.Determination of Steady-State Kinetic Parameters of 1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate Synthase by Pre-column Derivatization High Performance Liquid Chromatography Using 2,4-Dinitrophenylhydrazine as Derivative Reagent[J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2012(12):1859-1864. |
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| Authors: | HU Yue WANG Xue-Jiao LI Heng GAO Wen-Yun |
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| Institution: | *(College of Life Sciences,Northwest University,Xi′an 710069,China) |
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