| 人IL-16基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 高志涛,宋海岩,朱茉莉.人IL-16基因重组腺病毒载体的构建与鉴定[J].高分子学报,2011,26(12). |
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| 作者姓名： | 高志涛 宋海岩 朱茉莉 |
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| 作者单位： | 1. 新乡医学院免疫学研究中心,河南,新乡,453003
2. 新乡医学院解剖学教研室,河南,新乡,453003
3. 新乡医学院药学院,河南,新乡,453003 |
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| 基金项目： | 河南省临床检验诊断学重点学科课题基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建并鉴定人白细胞介素16(IL-16)的重组腺病毒pAd-IL-16表达载体,为进一步研究IL-16功能奠定基础.方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),组胺刺激后提取总RNA,RT-PCR扩增IL-16基因,将其克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)标记的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV后,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAd-IL-16,转染 HEK 293T细胞包装病毒.荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光,测定病毒效价,RT-PCR和Western blot分别分析细胞内IL-16 mRNA和蛋白质的表达.结果:经双酶切及基因鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见约400 by插人片段,测序结果和GenBank中的基因序列一致;重组病毒效价为2.8×10～8 pfu/mL;重组病毒感染后,HEK 293T细胞中IL-16mRNA和蛋白质均有表达.结论:成功构建IL-16重组腺病毒载体,并可在HEK 293T细胞中表达,为进一步研究IL-16的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | IL-16 重组腺病毒 构建 表达 |
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