| 阅读框架内乳腺癌cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 王海霞,钟理,曾伟,葛昆,张波.阅读框架内乳腺癌cDNA文库的构建[J].科技信息,2007,172(29):99-101. |
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| 作者姓名： | 王海霞 钟理 曾伟 葛昆 张波 |
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| 作者单位： | 河北大学生命科学学院，City of Hope National Medical Center 1500 East Duarte Road Duarte，CA 91010-3000，河北大学生命科学学院，河北大学生命科学学院，河北大学生命科学学院 |
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| 摘 要： | 目的:为构建高质量乳腺癌噬菌体展示文库,用pKE-2质粒载体经卡那抗性筛选富集开放阅读框架(open-reading frame ORF)内阳性克隆。方法:用Trizol试剂提取乳腺癌组织总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoR/Hind接头,用EcoR和Hind消化接头,使形成两端分别带有EcoR和Hind粘性末端的双链cDNA,将其连接于带有EcoR和Hind末端的pKE-2质粒载体,转化大肠杆菌DH5α,经卡那抗性筛选,富集ORF克隆。结果:经过ORF筛选,文库中ORF克隆比例达到80%,较筛选前的5%提高75%。
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| 关 键 词： | 乳腺癌 开放阅读框架 卡那抗性 pKE-2质粒载体 |
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