超高效液相色谱串联质谱联用法快速筛选3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂 |
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引用本文: | 吴琼,王世聪,马俊锋,李婉南,邢述,付学奇.超高效液相色谱串联质谱联用法快速筛选3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂[J].分析化学,2013(7):1013-1018. |
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作者姓名: | 吴琼 王世聪 马俊锋 李婉南 邢述 付学奇 |
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作者单位: | 吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室 |
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基金项目: | 教育部博士点基金项目(No.20090061110019)资助 |
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摘 要: | 建立了超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)检测酶促反应体系中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)浓度变化,快速筛选3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)抑制剂的方法。优化了HMGCR酶促反应体系和检测NADPH的色谱-质谱条件,探讨了NADPH的离子化试剂的作用和质谱碎裂机理。采用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以三乙胺/六氟异丙醇缓冲液(pH=8.0)为流动相,流速0.3 mL/min,柱温30℃,电喷雾离子源-多反应监测模式,对酶促反应体系中的NADPH进行分析。NADPH的峰面积与其浓度在0.05~50μmol/L范围内呈良好的线性关系(r>0.9996),定量限(S/N=10)为0.05μmol/L。
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关 键 词: | 超高效液相色谱串联质谱 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 抑制剂筛选 |
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