高效液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中雌三醇的含量

取犬血浆500μL,加入20.0μg·L~(-1)氯霉素内标甲醇溶液50μL,用甲基叔丁基醚(MTBE)先后萃取2次,使样品中雌三醇(E_3)溶入MTBE中,MTBE的加入量均为1.00mL,充分摇匀2.0min后,离心10min。收集并合并2次萃取的上清液,氮吹至干。加入甲醇100μL溶解残渣后再次离心10min,取上清液(10.0μL)进样进行色谱分离。用Agilent XDB-C18色谱柱为固定相,和以不同比例的乙腈(A)和水(B)的混合液作流动相进行梯度洗脱。串联质谱分析中采用电喷雾离子源负离子扫描和多反应监测模式。测得E_3的线性范围在0.2～40.0μg·L~(-1)之间,测定下限(10S/N)为0.2μg·L~(-1)。在空白犬血浆中加入E_3标准溶液进行回收率和精密度试验,测得日间回收率在93.3%～110%之间,测定值的日内和日间相对标准偏差(n=5)分别在1.6%～3.1%和4.2%～5.9%之间。