sPLA_2cDNA表达载体的选择和亚克隆 |
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引用本文: | 傅桂莲,王真,彭德,德伟林,李国昌.sPLA_2cDNA表达载体的选择和亚克隆[J].北华大学学报(自然科学版),1998(2). |
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作者姓名: | 傅桂莲 王真 彭德 德伟林 李国昌 |
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作者单位: | 吉林医学院临床生化教研室!吉林132001(傅桂莲,王真,彭德,李国昌),吉铁中心医院检验科(德伟林) |
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摘 要: | 目的:选择适当的载体,启动Ca~(2 )依赖分泌型磷脂酶A2(SecretaryphospholipaseA2sPLA2)cDNA的表达,为进一步研究各种因素对该酶活性的影响奠定基础。方法:首先从sPLA2-pGEM7重组体(这一重组体不能在转染的真核细胞中表达)获得人sPLA2cDNA,克隆该片断进入中间载体BSSK(使aPLA2cDNA两端出现XbaI、Hind3酶切位点),选择antisensesPLA3-BSSK重组体进行扩增,双酶消化上述重组体及PRC/CMV,电洗脱回收aPLA2片断及线性化的载体PRC/CMV,定向连接sPLA2-PRC/CMV,重组体转染鼠巨噬细胞,筛选,扩增阳性克隆;提取RNA,Northem杂交法检测sPLA22mRNA。结果:应用定向克隆方法,成功地制备了sPLA2-PRC/CMV重组体。用这一重组质粒转染鼠巨噬细胞后,Northem杂交检测到了sPLA2-mRNA的表达。结论:SPLA_2-PRC/CMV是一有效的表达系统。
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关 键 词: | 磷脂酶A_2 定向克隆 Northemblot |
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