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| 污染土壤中主要石油降解基因AlkB和Nah定量检测方法的建立和应用 | |
| 作者姓名： | 刘庆龙 唐景春 万晓彤 |
| 作者单位： | 南开大学环境科学与工程学院环境污染过程与基准教育部重点实验室天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室; |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.31270544);博士点基金项目(博导类)(No.20120031110015);863重大项目(No.2013AA06A205);天津市自然科学基金项目(No.10JCYBJC05600)资助~~ |
| 摘 要： | 建立了SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链式反应(Real Time-qPCR)检测油田污染土壤中烷烃降解基因AlkB和萘降解基因Nah的方法。比对相关降解石油菌株的GenBank序列,设计合成针对烷烃和萘降解基因扩增引物AlkBf/AlkBr和Nahf/Nahr。将纯化的常规PCR胶回收产物与pEASY-T1载体连接,转化到感受态细胞培养。提取并梯度稀释阳性克隆质粒,构建Real Time-qPCR标准测定曲线。25μL扩增体系最佳反应条件:前后引物终浓度为0.2μmol/L,12.5μL 2×TransStart Top Green qPCR SuperMix,AlkB和Nah基因最适退火温度分别为50℃和57℃。Real Time-qPCR技术显示出很高的灵敏性和重复性,比传统PCR技术灵敏度高100倍。对采集于某油田3个功能区的14土壤样品中AlkB定量检测显示,石油污染严重的采油区含有最高的AlkB拷贝数,污染较轻的生活区AlkB拷贝数最少;Nah基因分布均匀。 |
| 关 键 词： | 石油烃降解基因 荧光 聚合酶链式反应 SYBR Green I 烷烃降解基因 萘降解基因 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |