耐热DNA聚合酶Ⅰ大片段消除DNA顺序测定中的发夹结构的影响

本文从脂肪嗜热芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus T-3468)制备的DNA聚合酶经枯草杆菌蛋白酶水解,得到耐热的聚合酶大片段,Sanger的双脱氧顺序测定方法结合定序载体M13的应用已被证明是获得大基因组的DNA顺序的最有效方法。然而,沿着单链DNA模扳形成的发夹结构常常会阻止DNA聚合酶的聚合反应,以致不能获得DNA顺序的信息,我们制备所得到的耐热DNA聚合酶Ⅰ大片段在65℃显示最大活性,当定序反应在该温度下进行时,DNA模板中的发夹结构就被解开。这样,从得到的定序凝胶上就可以顺利地读出核苷酸序列,获得满意的结果。