合成U3snRNA基因上游启动区构建ACC合成酶反义RNA-核酶嵌合基因的植物表达载体

利用反义 RNA和核酶进行基因表达调控是当今植物分子生物学的研究热点之一 .但在转基因植物中 ,利用 RNA聚合酶 型启动区表达效率不高 .番茄 U3sn RNA基因由 RNA聚合酶 来转录 ,具有较高的转录效率 ,为一般转录效率的 1 0 0～ 1 0 0 0倍 .我们人工合成了番茄 U3sn RNA基因上游启动区 ( 1 5 2 bp) ,构建到番茄 ACC合成酶的反义 RNA-核酶嵌合 DNA序列的上游 ,然后将“启动区 -反义 RNA-核酶嵌合 DNA序列”插入到植物双元表达载体p GA6 4 3中 ,并用三亲融合法导入农杆菌 LBA4 40 4中 ,为研究 U 3sn RNA上游启动区增强反义 RNA-核酶基因的表达奠定了基础     

Star-PAP蛋白的纯化分析及其限定性因子的分离

克隆并构建了Star-PAP的表达载体,然后将该载体转染HEK293细胞,经纯化得到了重组的Star-PAP蛋白.以细胞总RNA和体外转录的U6snRNA为底物,对纯化到的Star-PAP的TUTase活性进行了分析.结果显示重组的Star-PAP能够对细胞总RNA以及U6snRNA进行体外尿苷化修饰,表明纯化到的Star-PAP具有良好的TUTase活性.此外,使用HPLC分离得到了具有U6snRNA底物特异性的细胞核组分.该组分除了含有StarPAP外,还含有一种未知蛋白,该未知蛋白可能就是赋予Star-PAP底物特异性的限定性因子.     

水稻基因组中U2snRNA基因连锁的分析

根据Ｕ２ｎＲＮＡ基因的保守性和结构特点设计引物,通过ＰＣＲ法扩增Ｕ２ｓｎＲＮＡ连锁基因间区的ＤＮＡ片段并进行顺序分析,证实在水稻中至少存在一组Ｕ２ｓｎＲＮＡ连锁基因。对水稻总ＤＮＡ的ＰＣＲ分析结果表明,水稻中可能还存在其他形式的连锁基因。ＰＣＲ方法可以有效地应用于结构保守基因的连锁分析中。     

大鼠4．5S snRNA的cDNA序列对荧光素酶基因表达的影响

利用脂质体转染法将大鼠4．5S snRNA cDNA重组载体转染小鼠肾离体培养细胞,连续培养48h,96h和144h检测荧光酶活性发现,4．5S snRNA cDNA插入表达载体的方向不同对荧光素酶基因表达的影响无差异,重组体转化的细胞中荧光素酶基因表达的活性与对照组相比提高2－2．2倍,4．5S snRNA cDNA对荧光素酶基因表达的影响,随转染细胞培养时间的延长而表达活性迅速下降,其下降速度实验组比对照组要快得多。     

核仁小分子RNA基因的起源初探

通过分析、比较含ＢｏｘＣ／Ｄ和含ＢｏｘＨ／ＡＣＡ这两类ｓｎｏＲＮＡ的一些代表与几种剪接体ｓｎＲＮＡ的序列和二级结构特征，研究它们的进化关系，并探讨ｓｎｏＲＮＡ是起源于内含子还是后来才插入到内含子中这一与ｓｎｏＲＮＡ的起源密切相关的问题．结合对剪接体ｓｎＲＮＡ起源的有关研究，提出两类ｓｎｏＲＮＡ最初是起源于原始Ⅱ类内含子中的不同部分的观点．     

水稻广陆矮4号基因文库的构建及U2snRNA基因的筛选

水稻广陆矮４号黄化苗总ＤＮＡ经Ｓａｕ３Ａ部分酶切，回收１２－２３ｋｂ片段，经ＣＩＰ脱磷后克隆于ＥＭＢＬ３载体，建立了水稻基因文库。以拟南芥的Ｕ２．２ｓｎＲＮＡ基因为探针，从基因文库中筛选到１３个阳性克隆，经不同酶切鉴定，初步判断有８种不同的克隆，对其中一个克隆ＦＤＲＧＵ２－３的重组ＤＮＡ构建了物理图谱，Ｕ２ｓｎＲＮＡ的一个基因已经定位在该克隆中１．５ｋｇ的Ｓａｌ－Ｉ－ＢａｍＨＩ酶片段上。