二硫键寡核苷酸Microarray用于丙型肝炎病毒检测及HCV1b分型的研究

利用二硫键法制作寡核苷酸DNA Microarray,并将该技术应用到HCV检测中,建立了一种快速、灵敏、安全的寡核苷酸DNA Microarray丙肝病毒检测体系。该体系还可同时对占中国丙肝病毒75％左右的HCV1b亚型进行分型。另外,在丙肝病毒基因组RNA反转录的过程中采用随机引物,从而为进一步的多种肝炎病毒的寡核苷酸DNA Microarray混合检测奠定了基础。     

简并引物法克隆保加利亚乳杆菌β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因

β-N-乙酰氨基己糖苷酶(β-Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶活性并可以催化切除β-N-乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作用.选取与保加利亚乳杆菌LJJ亲缘关系近的菌种的β-N-乙酰氨基己糖苷酶蛋白序列,利用ICO-DEHOP和CODEHOP在线简并引物设计软件设计β-Hexcase简并引物,选取Hex1-f和Hex1-r引物对,以LJJ基因组DNA为模板经PCR扩增得到614 bp产物.PCR产物连接pGEM-T质粒载体后克隆至大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆提取质粒进行测序.测序结果显示产物长度为614 bp,该DNA序列经blastx比对发现与其他已知β-Hexcase基因具有相似性,表明所克隆的序列即为LJJβ-Hexcase的基因片段.β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因的获得为进一步研究β-N-乙酰氨基己糖苷酶与保加利亚乳杆菌自溶的关系奠定了基础.     

玉米候选抗病相关基因片段的克隆

根据已经克隆的植物抗病基因和候选抗病基因的保守序列P-loop、Kinase-2及GLPLAL设计一系列简并引物，利用同源序列扩增法，对玉米的基因组DNA进行PCR扩增，并对5个扩增产物的克隆进行测序．测序结果在Gen—Bank内进行BLAST检索，发现A9克隆序列与玉米BAC库中的206C17克隆的部分序列有很高的相似性，并且距离GenBank内注册的玉米抗锈病基因rpl位点中的rpl-3基因、rpl-4基因分别约有66Kb、20Kb，且A9克隆序列在玉米基因组中是单拷贝的．这为玉米抗锈病性状的分子标记辅助选择和抗锈病基因的克隆奠定了良好的基础。     

水稻抗条纹叶枯病分子标记在不同品种中的扩增比较

以感水稻条纹叶枯病品种＂日本晴＂、高抗品种＂kasalath＂以及14个目前在我国长三角地区水稻生产中被认为在抵抗条纹叶枯病方面具有较好效果的水稻品种为材料,分析比较了14对分子标记引物扩增16个水稻品种基因组获得的DNA产物.结果显示：在14对分子标记引物中,有8对在扩增感病品种＂日本晴＂和高抗品种＂Kasalath＂水稻基因组时可获得多态性条带.因此推断这8个标记可在以这两个品种为亲本的抗条纹叶枯病选育中使用;并且,本研究结果还将为利用本试验收集的14个水稻品种为亲本的分子标记辅助育种提供重要的背景信息.     

中药材桔梗及其易混品的DNA条形码分子鉴定

为了特异性地鉴别桔梗药材Platycodon grandiflorum及其易混品,通过优化DNA提取方法,并基于ITS(internal transcribed spacer)序列上的特异性位点,设计特异性引物,进行特异性PCR扩增,以扩增成功率为判定指标快速鉴别桔梗药材真伪.研究结果表明,改良CTAB(cetyltr...     

应用PCR技术对家禽病毒性肿瘤病进行鉴别诊断的研究进展

概述聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术应用于家禽马立克氏病、禽白血病和网状内皮增生症鉴别诊断的研究进展,主要内容包括病毒的基因组结构特征,各病毒的特异性基因或序列及其ＰＣＲ引物的位置和序列,以及ＰＣＲ技术对肿瘤病特异鉴别诊断的应用。将ＰＣＲ技术与其它传统的技术进行比较,ＰＣＲ技术具有敏感性高、特异性好、快速、简便的特点,是目前鉴别诊断家禽病毒性肿瘤病最有效的、最快捷的方法之一。     

New universal primers facilitate Pyrosequencing

A cost-driving factor in Pyrosequencing is the need for single-stranded PCR products that are usually obtained by biotin-labeling of one primer. We designed new universal primers that allow the introduction of biotin during the specific PCR at either the forward or the reverse primer in a single reaction. When converting five human single nucleotide polymorphism assays from the standard format into the universal format, we obtained pyrograms of similar good quality. Although the universal nonhuman sequences are unlikely to form loop structures, we mostly failed to establish assays without using the proprietary software from Biotage AB. Nevertheless, our universal primer pair adds flexibility to the process of assay design due to optional strand selection and contributes to the reduction of genotyping costs.     

聚合酶链反应法扩增免疫球蛋白变区基因

用异硫氰酸胍抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞株2F7的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出351 bp的重链变区基因(V_H)和324bp轻链变区基因(V_L),分别克隆至pUCV_(NP)-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的变区基因.     

利用生物信息学资源设计简并引物

根据已知序列设计简并引物以分离基因家族内的其他新成员，是发现新基因的一条捷径．介绍了利用生物信息学资源设计简并引物的各个步骤：利用在线服务滚动式搜索家族所有成员序列；对家族成员序列进行多序列对比；确定合适的保守区域；利用专业软件设计引物；并对引物进行修饰等。     

Tetrazene–Characterization of Its Polymorphs

The reinvestigation of tetrazene single crystalline material by means of X-ray methods resulted in a slightly different structure when compared to previously published data. Reaction conditions responsible for different crystalline modification formation were investigated. Newly described C form was found to be the primary reaction product and the combined action of temperature and the presence of water over time is required for the transition to the A form. Both forms were described by X-ray powder diffraction. Tetrazene was also subjected to infrared and Raman spectroscopy, which allowed differentiating between the forms. The molecule was isotopically labeled with ¹⁵N atoms at two different locations (ring and nitrogen sidechain) and employed in assigning vibrational modes to the resulting bands. Differences between sensitivities to mechanical stimuli of the two modifications were investigated and found industrially insignificant. In the same vein, the performance of either modification in primer composition and primer was identical.