地衣芽孢杆菌A13重组表达黑曲霉植酸酶phyA基因的研究

将黑曲霉Z6植酸酶phyA基因置于芽孢杆菌强启动子F1下,与大肠-芽孢杆菌穿梭表达载体pHY300PLK连接,重组质粒pHY300-F1-phyA电击转化地衣芽孢杆菌A13。筛选阳性克隆,获得重组菌株A13-F1-phyA,PCR扩增及酶切验证表明植酸酶基因已转入地衣芽孢杆菌。SDS-PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明,重组菌株中植酸酶得到了有效分泌和表达。     

毕赤酵母表达重组植酸酶酶学性质的比较研究

通过酶学性质比较毕赤酵母GS115表达的E.coli K12植酸酶(appA)及其突变体植酸酶(appA NR)和黑曲霉植酸酶(phyA)的最适pH、温度、热稳定性及对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性.结果表明,在95℃,加热10 min,appA NR可残余90％左右的活力,而其他两种只残余20％～50％的活力;appAN...     

大肠杆菌植酸酶appA的融合表达及耐热性研究

提取大肠杆菌(SUGL)基因组DNA,通过PCR方法从基因组扩增得到植酸酶基因ap-pA,测序结果表明该基因的ORF读框包含1440个核苷酸.将该基因重组于大肠杆菌表达载体pET-32a(+)中,导入大肠杆菌BL21(DE3),构建工程菌BL21(DE3)-pET32a-appA.对表达条件进行了优化,在30℃下,以0.1mmol/L IPTG诱导表达植酸酶,表达量达到10%以上.在37℃,用钒钼酸铵法测定了表达的植酸酶活性为40740.7U/g,同时观察不同加热温度对植酸酶活性的影响程度.发现融合表达的     

一株产纤维素酶和植酸酶的米曲霉的诱变筛选和固体发酵

通过紫外诱变和微波辐射米曲霉菌株,筛选出高产纤维素酶和植酸酶米曲霉菌株ZQH48,并进行了固体发酵条件的优化.优化后的培养基配方为:菌渣:麸皮=1:1,氯化铵12%,蛋白胨2%,硫酸镁0.07%,氯化钠0.5%,磷酸二氢钾0.02%,固水比为1:1;最佳培养温度35℃.优化后纤维素酶活力可达161.55 U/g,较原始...     

微生物植酸酶的研究与应用

植酸酶做为一种新型的酶制剂，引起了国内外研究者的极大关注。本文综述了微生物植酸酶的分类、来源、作用机理、菌种选育、基因工程、检测方法、存在问题和应用前景。     

转植酸酶基因海水小球藻生理生化的初步研究

从42个转植酸酶基因小球藻单克隆藻株中筛选出植酸酶产量较高的8个株藻,经过7次传代,各藻株的植酸酶活保持在稳定的状态,证实植酸酶基因在小球藻中获得了稳定表达.对转基因小球藻所产生植酸酶的性质进行了初步研究,结果表明此酶最适作用pH值为3.8和6.0,最适作用温度为65℃.在相同培养条件下,转基因藻与未转基因藻生理指标并无明显差异,说明外源植酸酶基因的转入对小球藻的生长及生理指标无明显影响.     

麦麸、细菌性植酸酶和柠檬酸对肉鸡提高钙、磷和蛋白质利用的影响

以23%粗蛋白（CP）的玉米豆粕日粮为正对照,以添加了15%麦麸（提供内源性植酸酶）的低营养玉米豆粕日粮（21%CP）为负对照,研究内源性及细菌性植酸酶和柠檬酸在低营养肉鸡日粮中对肉鸡生长的作用.实验结果表明：所有组的胫骨灰分差异不显著（P＞0.05）.添加细菌性植酸酶或柠檬酸的日增重（ADG）、肉料比（G/F）和钙利用率与正常营养水平组差异不显著（P＞0.05）,但粪磷排泄量和蛋白质的利用率显著低于正对照组（P＜0.05）,磷的利用率极显著高于正对照组（P＜0.01）.已添加内源性植酸酶组除ADG、G/F和CP利用率低于正对照组外,其它的差异不显著（P＞0.05）.三者同时添加（第5组）的粪磷排泄量降低了1.4%（P＜0.05）;钙的利用率极显著地高于其它4个组（P＜0.01）,最大提高了7.2%;G/F与第1组相当,增高3.9%;在蛋白利用率上也显著地高于其它3个组,高出2.3个百分点（P＜0.05）.可以看出内源性及外源性植酸酶和柠檬酸在肉鸡的生长方面能起到补充或协同的作用.     

地衣芽孢杆菌植酸酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据已发表的Bacillus licheniformis植酸酶基因DNA序列(13eneBank AF469936),设计并合成了一对引物,应用PCR技术,以地衣芽孢杆菌AB91062的总DNA为模板,扩增出了植酸酶基因phyL的编码区,并将其克隆到pMD18-T载体上,进行了序列测定,测序结果经Genetool序列分析表明该基因编码区长1146bp,编码381个氨基酸,与已发表的Bacillus lichenjformis植酸酶基因序列在核苷酸水平上与所发表的序列有92％的同源性;在氨基酸水平上与已发表的衣芽孢杆菌植酸酶相似性为93％．并将该基因编码区克隆到大肠杆菌表达质粒pHBM625上,并在大肠杆菌中实现了高效表达,表达产物具有正常的生物学活性．     

重组Pichia酵母(Muts)发酵过渡阶段关键酶活分析

重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明：甲醇诱导3h AOX2酶活为0,4h时突然增加到0．05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在过渡阶段甲醛脱氢酶和6-P-葡萄糖脱氢酶分别增加了6．1倍、2．5倍,而丙酮酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶分别下降为原酶活的29．4％及16．4％,表明甲醇诱导后甲醇完全氧化代谢途径得到强化,而糖酵解途径和三羧酸循环途径代谢作用减弱。     

植酸酶高产菌株的选育

从土壤中分离到1株植酸酶高产菌株Pe0,初步鉴定为米曲霉.为了提高植酸酶活力,对Pe0菌株分别进行紫外线和亚硝基胍诱变处理,经初筛、复筛、遗传稳定性能检测,得到1株酶活相对较高、性状相对稳定的菌株Pe2#,酶活稳定在10.66U/mL,较原始菌株提高到3.34倍.另对其发酵条件进行优化,确定最适接种量为4%,最适pH为5.5,最适培养时间为6.5d.在此基础上进行培养基正交优化,结果表明:葡萄糖质量浓度为25g/L,蛋白胨质量浓度为4g/L,(NH4)2SO4质量浓度为2g/L,MgSO4.7H2O质量浓度为0.1g/L时所得菌株产酶活力最高.