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麻疯树(Jatropha curcas)毒蛋白curcin基因家族成员的分离和描述 总被引:5,自引:0,他引:5
麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离.它们都不合有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs),证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码.四个curcin基因家族成员和另两个已知curcin基因家族成员的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)的序列比对结果显示curcin基因家族成员至少可分为两个亚类群,亚类群之间的氨基酸序列相似性低于88%.分别将这4个curcin基因家族成员命名为curA2、curA3、curB2、curB3.对四条基因启动子区和ORF生物信息学分析推测CurB2、curB3可能是被真菌及逆境诱导的curcin基因家族成员全长,而curA2、curA3可能是麻疯树胚乳贮存的curcin基因家族成员全长.Southern杂交结果显示,麻疯树基因组中至少有3个以上curcin基因家族成员. 相似文献
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以粳稻(Japonica)品种日本晴与中花11号为材料,对影响农杆菌介导水稻转化体系的几个因素进行了研究,建立了农杆菌介导的有效水稻转化体系.在该体系中,首次使用浓度为10-4g/mL嘌呤合成抑制剂acivicin在转化前对水稻愈伤组织进行预处理,结果表明此法可有效提高GUS基因的瞬时表达率.同时,利用插入了麻疯树毒蛋白(curcin)基因的植物表达质粒pBI121-curcin,通过农杆菌介导转化水稻,获得了多株转基因植株.通过PCR鉴定,证实curcin基因已整合到水稻基因组中. 相似文献
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麻疯树毒蛋白对小鼠器官的急性毒性研究 总被引:3,自引:2,他引:1
研究麻疯树毒蛋白(curcin)对小鼠器官的急性毒性作用.用一定浓度梯度20、25、31、38.4、48、60×10-3g/kg的蛋白溶液腹腔注射小鼠,并用Bliss方法计算出其腹腔给药的半数致死量(LD50)为37.70×10-3g/kg,95%可信限为(33.228~43.151)×10-3g/kg.对用药小鼠器官进行病理切片研究,结果显示20×10-3g/kg的用量几乎未见对器官的异常影响,在(25~48)X 10-3 g/kg范围内对小鼠的重要器官损伤较小,部分器官如肝、肾、肺见灶性水肿充血;当给药剂量达到60X10-3g/kg时观察到肝脏细胞肿胀、出血明显,肺部充血出血、灶性区域纤维素渗出,胰腺明显充血、有部分个体出现胰腺脂肪变,部分个体的肾出现弥漫性充血.这为麻疯树毒蛋白制备免疫毒素的应用提供了参考. 相似文献
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建立了一种非放射性的利用兔网织红细胞裂解液(Rabbit Reticulocyte Lysate)无细胞翻译系统和荧光素酶检测系统(Luciferase Assay System)的核糖体失活蛋白检测方法,快速检测了两种方法提取的麻疯树核糖体失活蛋白(RIPs)Curcin的无细胞蛋白质翻译抑制活性,测得离子交换层析法纯化Curcin的IC50=0.045±0.009nmol/L,分子筛层析纯化Curcin的IC50=0.217±0.026nmol/L;该方法避免了放射性同位素的使用,使检测过程简便、快速 相似文献
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麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定 总被引:3,自引:2,他引:3
麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western blot鉴定戎 芳1,2,王胜华1,赵小光1,郭 亮1,魏 琴1,唐 琳1,徐 莺1,陈 放1, (1.四川大学生命科学学院,成都610064;2.安徽大学生命科学学院,合肥230039)麻疯树(JatrophacurcasL.)系大戟科麻疯树属植物,耐干旱贫瘠,抗病虫能力强[1,2],主要生长在热带和亚热带地区,在我国西南地区有丰富的资源.麻疯树种子对整体动物,如小白鼠[3]、羊[4]及人,特别是幼儿[5]表现出一定的毒性,且具有致死作用.麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin),该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具抗癌活性[6],是一种具开… 相似文献
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麻疯树逆境蛋白(curcin 2)基因的原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将编码麻疯树逆境蛋白curcin 2成熟蛋白的M片段和编码前体蛋白的P片段分别定向克隆到质粒载体pQE-30、pQE-31后,获得重组质粒pQE-30-M、pQE-31-P.该重组质粒转化大肠杆菌M15菌株,经IPTG诱导后M片段表达的蛋白质主要以包涵体形式存在,蛋白质的表达量与IPTG浓度及诱导时间有关.重组蛋白可与RGS-His抗体及curcin抗体分别发生专一性抗原抗体反应并被His TrapTMHP柱亲和纯化.体外抗真菌活性实验表明,复性处理后的curcin 2融合蛋白使玉米弯胞杆菌[Curvul 相似文献
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