中药土鳖虫溶栓成分的分离纯化研究

对土鳖虫水浸醇沉提取物2号样品进行了离子交换柱层析，得组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。实验结果表明，组分Ⅲ的溶栓活性明显高于组分Ⅰ和组分Ⅱ，其蛋白质占量为88．9％，分子量约为38，018，效价为313UK／mg，比活力为352UK／mg蛋白。将组分Ⅲ再进行凝胶过滤柱层析，得组分Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。组分Ⅵ的生物活性高于组分Ⅳ和组分Ⅴ，蛋白质含量为89．3％，电泳呈现两条带，分子量约为34，623和39，811，效价为77UK／mg，比活力为86UK／mg蛋白。将组分Ⅵ进行反相高效液相色谱柱层析，收集保留时间为17min的洗脱峰，得到土鳖虫纯蛋白质，呈白色絮状，极易溶于水。再一次用反相高效液相色谱检查其纯度，保留时间为17．073min．无杂质峰。纤溶活性实验结果表明，组分Ⅵ既有直接降解纤维蛋白的作用，同时也有纤溶酶原激活剂样作用。     

氨基酸分析仪法快速检测土鳖虫中谷氨酸含量

采用氨基酸分析仪建立了土鳖虫中谷氨酸含量的检测方法,比较不同浓度的盐酸以及不同料液比、提取时间对土鳖虫中谷氨酸提取效果的影响。结果表明,土鳖虫中谷氨酸的最佳提取工艺为6 mol/L 的盐酸消解,料液比1:1（mg/mL）,水解时间22 h,建立的谷氨酸分析仪法回收率为99.2%,精密度试验相对标准偏差为0.19%,不同地区土鳖虫中谷氨酸质量分数存在较明显差异,范围为1.068%~1.149%。该方法重现性好、快速高效、操作简便,适用于土鳖虫中氨基酸含量的检测,可为其质量控制及资源深入开发提供技术支持。     

黑冀地鳖和中华真地鳖三种同工酶的比较研究

用聚丙烯酰胺垂直平板凝胶电泳法分析比较了新疆黑冀地鳖polyphaga obscurachop和中华真地鳖Eupolyphaga sinensis Walker的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乳酸脱氢酶(LDH)三种同工酶的电泳酶谱,研究结果表明:两种地鳖各自具有不同的特征性酶谱;不同组织具有不同的特征性酶谱;酯酶(EST)同工酶的两种地鳖中的活性均较高,而乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的活性则较低.     

土鳖虫糖蛋白的提取及抗肿瘤活性初步研究

以新鲜的雌性土鳖虫原药材为研究对象,其水提物经乙醇沉淀,Sevag法除蛋白,DEAE-50纤维素离子交换层析柱等方法分离纯化后,得到糖蛋白组分,用糖蛋白组分分别对两种肿瘤Hela和食管癌Eca109细胞进行体外药物敏感性实验,结果显示,氯化钠洗脱浓度为0.4 mol/L时的洗脱峰组分在低浓度(<10 mg/L)水平对以上两种肿瘤细胞均有明显抑制作用,表明土鳖虫具有潜在的抗肿瘤作用.     

中药土鳖虫中Ca、Mg、Zn和Mn 4种微量元素的含量测定

本文采用HNO3和HClO4消解土鳖虫样品,火焰原子吸收光谱法测定其中Ca、Mg、Zn、Mn含量。方法简单,精密度高,加标回收率在96.86%—102.46%之间,相对标准偏差(RSD)小于2.36%,结果令人满意。     

土元溶栓蛋白的原核表达和活性检测

本文利用兼并引物成功克隆到土元类胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶基因,通过构建该基因的原核重组表达载体及IPTG体外诱导,包涵体蛋白复性,Ni 2+柱亲和层析纯化,最终获得了重组表达目的蛋白.经体外检测,该蛋白具有较好的溶栓活性,这为揭示土元溶栓作用的分子基础及其进一步的开发利用奠定了基础.     

单一饲料及其搭配养殖中华真地鳖效果研究

采用单一饲料的玉米、麦麸、米糠以及由它们配制成的粗蛋白质含量分别为13.5%、15.1%和16.5%的3种配合饲料共6种饲料搭配投喂模式,研究其对养殖中华真地鳖效果的影响。结果表明,中华真地鳖分别摄食3种配合饲料后的生长速度均比3种单一饲料的要快,其中以投喂粗蛋白质含量为15.1%组的生长速度最快;分别投喂3种单一饲料的中华真地鳖,除玉米组外的其余2个组的饲料成本均明显低于3种配合饲料各组,并且以投喂麦麸组所取得的经济效益最显著。     

地鳖纤溶活性蛋白(EFP)的分离纯化、红外光谱分析及抑制鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成研究

以传统中药材地鳖为原料, 采用匀浆、盐析、硫酸铵分段沉淀、透析和DEAE-52纤维素离子层析等纯化方法, 从其体内分离纯化得到一种纤溶活性蛋白(Fibrinolyric protein of Eupolyphaga sinensis Walker, EFP), 采用SDS-PAGE电泳法对该蛋白进行了分子量和纯度测定, 结果表明, 从地鳖中提取纯化的EFP为相对分子量为41300的单一成分, 具有明显的纤溶活性, 由蛋白质和糖的红外光谱特征吸收峰可推断EFP为一种糖蛋白. EFP对鸡胚尿囊膜新生血管生成有良好的抑制作用, 比阳性对照组(地塞米松组)对鸡胚生长发育影响要小. 地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用, 有可能用于肿瘤治疗.