Determination of polybrominated diphenyl ethers in fish tissues by matrix solid-phase dispersion and gas chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry: Case study on European eel (Anguilla anguilla) from Mediterranean coastal lagoons

This paper describes the development and validation of an analytical methodology to determine 28 polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) in European eel (Anguilla anguilla) tissues using matrix solid-phase dispersion (MSPD) and gas chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry (GC-QQQ-MS/MS). A total of 28 PBDEs were targeted, including tri- to deca-brominated congeners.The robustness and effectiveness of the proposed sample preparation procedure was demonstrated in lipid-rich eel tissues. The use of batch MSPD with activated silica gel and H₂SO₄-impregnated silica gel, followed by H₂SO₄ digestion and multilayer cartridge clean-up allowed for complete lipid removal and eliminated matrix effects during GC-QQQ-MS/MS analysis. The average PBDE recoveries from eel muscle samples spiked with PBDEs at two levels were in the range 56.2-119.0%. Precision was satisfactory since relative standard deviations were lower than 19.6%, regardless of spike level, and method quantification limits ranged between 1 and 170 pg g⁻¹ (wet weight).The method demonstrated its successful application for the analysis of eel samples from two coastal lagoons located on the western French Mediterranean coast. All samples tested positive, but for tri- to hexa-brominated congeners only and total PBDE levels observed in this study were in the range 0.08-1.80 ng g⁻¹ wet weight.     

性类固醇激素诱导雌性日本鳗鲡性腺发育过程中钙和脂肪的动员

7次埋植雄烯二酮(ADSD)或甲基睾酮（MT）后雌鳗的性腺成熟系数（GSI）显著升高,分别达到（24.94±7.24）%和（18.67±7.56）%,其肝体系数（HSI）也显著高于对照组;雌鳗卵巢中钙和脂肪含量明显提高,水分含量显著降低,灰分含量没有明显变化;肝脏中钙和脂肪含量也明显提高,水分和灰分含量明显降低;红肌和白肌中脂肪和灰分的含量则明显降低,水分和钙含量无明显变化;骨骼中钙含量明显降低,水分含量显著增加,脂肪和灰分的含量没有明显变化.表明ADSD和MT促进了钙从骨骼中和脂肪从肌肉组织中的动员,从而为雌性日本鳗鲡(Anguillajaponica)的卵巢发育提供了物质基础.     

海南产花鳗鲡细胞色素b基因的克隆及序列分析

线粒体细胞色素b基因是目前研究鱼类分子系统进化的重要分子标记.笔者以日本鳗鲡线粒体基因组序列为模板设计并合成引物进行PCR扩增,并将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和纯化后,克隆到pMD18-T载体、测序,成功得到全长为1 140 bp的海南产花鳗鲡细胞色素b(Cyt b)基因序列.将该基因全长序列递交到Genebank数据库,获得序列登录号为EF690363.用DNA分析软件MEGA2比较了海南产花鳗鲡与递交到GenBank中的8种分布在中国东南沿海、日本海域及南太平洋海域的鳗鲡属(Anguillia)细胞色素b基因的地理差异,并构建了系统进化树.结果显示:日本产和夏威夷产花鳗的地理差异小于海南产花鳗与它们之间的地理差异.     

时间分辨荧光免疫分析高灵敏检测嗜水气单胞菌

建立了生物素-链霉亲和素时间分辨荧光免疫分析（BAS-TRFIA）高灵敏检测嗜水气单胞菌的新方法.以兔抗IgG包被微孔板,加入嗜水气单胞菌菌株B18和生物素化IgG,生成的夹心复合物用Eu³⁺-链霉亲和素作为示踪物,Eu³⁺可与离解增强液形成时间分辨荧光（TRF）,通过TRF值对病原菌定量.方法的检测限为1.0×10² cfu/mL,在1.0×10~1.0×10⁶ cfu/mL范围内线性良好,相关系数0.9716.用该法检测时,不同来源的嗜水气单胞菌以及其它气单胞菌均呈阴性.板内和板间的变异系数分别小于5.00%和9.00%.所有相关检测试剂37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变.对60份人工感染的美洲鳗鲡组织样品,包括肝、肾、肠、鳃和肌肉等组织进行检测,阳性检测率为98.33%.结果表明,BAS-TRFIA法检测嗜水气单胞菌,灵敏度高、特异性好、操作简便,该方法为水产养殖病原菌检测提供了新的思路.     

花鳗鲡重组促黄体生成素在毕赤酵母中的表达

 采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以linker将两个基因连接成单个基因LHβα。然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα。再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7%甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000。     

9种中草药对鳗鲡病原菌体外抑菌活性的影响

对3株染病的日本鳗鲡肾脏中分离的致病菌进行活化,同时采用二倍稀释法以黄连、大黄、穿心莲、大青叶、黄岑、黄柏、鱼腥草、虎杖、苦参9种单味煎剂对3株分离菌和爱德华氏菌及嗜水气单胞菌的标准株进行最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定。结果显示大黄及虎杖体外抑菌活性最为理想。     

三种常用药物对欧洲鳗拟指环虫的杀灭效果比较

比较三种常用药物在不同浓度下对欧洲鳗拟指环虫的杀灭效果。结果表明：药浴72h后,最适药物浓度和杀虫率,欧指清、指环特灭、指环杀星分别为：O．20mg·L^-1,67．14％;0．40mg·L^-1,57．05％;0．50mg·L^-1,48．73％。根据厂家建议用量,将欧指清：指环特灭=0．20mg·L^-1;0．20mg·L^-1。进行联合用药,其杀虫率为86．36％。因此,三种药物中欧指清的杀虫率最高,且它与指环特灭合用的效果更佳。     

花鳗鲡和日本鳗鲡肌肉生化成分的比较研究

对花鳗鲡肌肉生化成分进行定量分析,结果表明：（1）花鳗鲡鲜肉中蛋白质含量为11．44％,脂肪5．08％,水分77．94％,是一种高蛋白低脂肪的鱼类。（2）花鳗鲡鲜肉中含18种氨基酸,总量为49．95％,其中含有8种人体必需氨基酸,总量为19．32％;具鲜甜味的天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸分别占鲜肉氨基酸总量的9．89％、19．80％、6．07％和5．43％。可认为是一种氨基酸组份较齐全、味鲜美的珍贵食用鱼类。进一步与日本鳗鲡比较,表明：花鳗鲡的营养价值优于日本鳗鲡;花鳗鲡和日本鳗鲡肌肉中氨基酸组份和含量高低相似;日本鳗鲡的氨基酸总量高于花鳗鲡。本研究可为花鳗鲡的种质鉴定、资源保护开发和养殖饲料配制等提供科学依据。     

温度对花鳗鲡黑仔苗生长和消化率的影响

设置水体温度为24、26、28、30和32℃五个试验组,饲养平均体质量为(0.95±0.09)g的花鳗鲡黒仔苗30 d,研究温度对花鳗鲡黒仔苗生长和消化率的影响.研究结果表明,不同温度对花鳗鲡黒仔苗生长和消化率有显著影响(P<0.05).温度为30℃时,质量相对增加率和特定生长率最高,分别为(79.98±4.35)%和(1.96±0.08)%·d-1,饲料系数最低,为1.62±0.07;消化率在30℃时也达到最高,在该温度下干物质表观消化率为(67.78±1.12)%,蛋白质表观消化率为(91.42±0.75)%.由研究结果知,花鳗鲡黒仔苗的最适生长温度为30℃.     

甲苯咪唑对鱼的急性毒性试验及驱虫效果研究

甲苯咪唑浓度为0 4×10-6和0 8×10-6时,5种试验鱼(日本鳗Anguillajaponicus、欧洲鳗Anguillaan guilla、翘嘴鳜Sinipercachuatsi、红剑XiphophorushelleriHeckel和建鲤Cyprinuscarpiovar.Jian)是安全的;浓度为2×10-6时,前3种试验鱼全部存活,而红剑和建鲤的死亡率为6%和4%.用浓度为0 2×10-6、0 4×10-6和0 8×10-6的甲苯咪唑药浴患伪指环虫病(感染率为92%)的欧洲鳗,用药1次,120h后其阳性检出率分别为54%、10%和0%.说明甲苯咪唑对欧洲鳗伪指环虫病有显著疗效.