鸭胚B淋巴细胞中间纤维的研究

从26天北京鸭胚胎的腔上囊中分离B淋巴细胞。应用细胞选择性系列抽提方法与DGD包埋——去包埋剂的电镜制样技术相结合,显示出了B细胞的中间纤维的超微结构及分布特点:纤维致密交织呈网络状,其特点是均匀地遍布于整个胞质空间,纤维单丝直径在9—11nm。间接免疫荧光实验结果表明,B细胞的胞质对波形蛋白单抗呈阳性反应,且也显示出了波形纤维呈网络状的结构形式。本文采用单向电泳、双向电泳和蛋白质免疫印迹技术,证实了B细胞中间纤维波形蛋白的分子量约为55KD。     

人心房成纤维细胞体外组织块贴壁培养与鉴定

从建立体外循环将进行心脏手术的风湿性心脏病患者体内无菌下取心脏停跳前右心耳组织，采用组织块贴壁法进行心房成纤维细胞的分离培养，通过光学显微镜观察培养后的细胞形态，并通过免疫细胞化学的方法鉴定所分离培养的细胞。贴壁4—6d后可见长梭形贴壁生长的细胞游离出组织块，细胞生长迅速，2—3d后即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，胞体较大，细胞浆透明，细胞核较大，呈椭圆形，无自发性搏动。免疫细胞化学检测显示所培养细胞波形蛋白呈阳性反应。通过组织块贴壁法顺利分离人心房成纤维细胞。     

镍铬联合染毒对成年大鼠睾丸波形蛋白表达的影响

目的:探讨镍离子(Ni2+)、六价铬离子(Cr6+)联合染毒对大鼠睾丸波形蛋白表达的影响。方法:40只雄性SD成年大鼠随机分为10组,每组4只。实验试剂硫酸镍(NiSO4)和重铬酸钾(K2Cr2O7)以质量分数为0.9%NaCl溶解,通过腹腔注射给药,连续染毒2周。A~J组每天用药的质量分数分别为:A组:不作任何处理;B组:0.9%NaCl溶液;C组:1.25 mg/kg Ni2+;D组:5 mg/kg Ni2+;E组:2 mg/kg Cr6+;F组:3 mg/kg Cr6+;G组:4 mg/kgCr6+;H组:1.25 mg/kg Ni2++2 mg/kg Cr6+;I组:5 mg/kg Ni2++3 mg/kg Cr6+;J组:5 mg/kg Ni2++4 mg/kg Cr6+。检测大鼠体质量、睾丸湿质量及睾丸脏器系数的变化。应用免疫组织化学方法检测睾丸波形蛋白的表达和变化。结果:E~J组大鼠体质量和睾丸湿质量与对照组相比较均显著降低(P0.01),各实验组睾丸脏器系数无显著变化(P0.05)。C~J组支持细胞及间质区波形蛋白表达量与对照组相比较均显著降低(P0.01)。H组与C、E组相比较,I组与D、F组相比较,J组与D、G组相比较,其支持细胞和间质区波形蛋白的表达量均显著降低(P0.01)。结论:Ni2+、Cr6+染毒能显著降低大鼠体质量、睾丸湿质量以及睾丸波形蛋白的表达,Ni2+-Cr6+联合染毒对睾丸损伤更严重。     

大鼠卵泡膜中肌成纤维细胞的形成及意义

目的:探讨肌成纤维细胞在卵泡膜中的形成及意义。方法:分别取动情期和非动情期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测肌成纤维细胞的特征性标记(α-SMA)和波形蛋白(vim entin)分别在这两组中各级卵泡卵泡膜细胞上的表达情况,并进行图像分析。结果:1.α-SMA和vim entin表达于卵巢的各级卵泡的卵泡膜细胞(窦前卵泡、小窦状卵泡、大窦状卵泡),在动情期组,两者在大窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,数量也最多,组内各级卵泡间它们表达的比较均有显著性差异(P<0.05),并且α-SMA和vim entin表达强度均与卵泡直径大小成正相关性(r分别为0.631和0.536);在非动情期组,α-SMA表达在小窦状卵泡的卵泡膜细胞表达最强,大窦状卵泡最弱,各级卵泡间α-SMA表达比较差异有显著性(P<0.05),除了窦前卵泡和小窦状卵泡vim entin表达比较差异无显著性(P>0.05)外,vim entin在其他卵泡间的表达比较差异也有显著性(P<0.05),但是α-SMA和vim entin的表达强度与卵泡直径大小无明显相关性(r分别为-0.087和0.224);α-SMA和vim entin的表达在上述两组各类型卵泡间比较也均有显著性差异(P<0.05)。结论:肌成纤维细胞存在于卵泡膜中,并可能在排卵过程中起重要作用。     

7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基金雀异黄素对卵巢上皮性癌细胞增值与迁移侵袭作用机制

目的:探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4′-dimethoxygenistein,DFMG)对卵巢上皮性癌细胞(skov3)增值、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度DFMG对skov3增殖的影响和计算半数药物抑制浓度(IC...     

波形蛋白-核酸复合物诱导的多特异性单抗

本文首次采用中间纤维波形蛋白(vimentin)-核酸复合物免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了一组多特异性单克隆抗体(polyspecific McAb),这些抗体能够分别与波形蛋白、DNA、磷脂以及其它生物化学结构不同的生物大分子结合,其抗原特异性与病人血清中的自身抗体(autoantibody)极为相似。抗原表位分析结果表明,抗体所识别的波形蛋白NH_2末端恰是波形蛋白结合DNA的位点。多特异性单抗的研制将为研究抗体交叉反应机制、自身抗体来源以及核酸与蛋白质的相互关系提供了一条新的途径。     

雌二醇强化壬基酚雄性毒性机理研究

为了揭示壬基酚进入生物体内后对雄性的毒性作用机制,以典型天然激素雌二醇(E2)为代表,以大鼠睾丸支持细胞为对象,研究了壬基酚与E2共存时对雄性生殖细胞的毒性并考察了其作用机理.研究结果表明,壬基酚与E2均能促进睾丸支持细胞增殖,表现出较强的雄性毒性,混合后呈现明显的强化效应,比二者单独作用高.对细胞中特征蛋白-波形蛋白的检测发现,E2不影响波形蛋白的表达,壬基酚可提高其表达,而混合物可明显提高其表达.机理分析表明,在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的3条通路中,ERK通路是E2强化壬基酚毒性的关键通路.壬基酚降低ERK蛋白的表达,E2轻微降低ERK蛋白的表达,混合后反而诱导ERK蛋白的表达.壬基酚能够显著诱导p-JNK蛋白、p38蛋白的表达,但与E2混合后,诱导作用减弱.转录因子分析表明,由于ERK通路被激活,壬基酚和E2混合物可极大地强化转录因子c-Myc蛋白和cyclinD1蛋白的表达.     

螅状独缩虫(Carchesium polypinum)类中间纤维的初步研究

利用间接免疫荧光和免疫印迹发现螅状独缩虫中存在两种分子质量为58ku和66ku的蛋白。这两种蛋白能分别与抗波形蛋白和抗核纤层蛋白B的抗体反应。分子质量66ku的蛋白位于大核边缘。另外,细胞经分级抽提后大核周围存在核纤层样结构。基于上述结果,可以认为螅状独缩虫中存在类中间纤维。