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Hai-hong ZHANG Xi-zhen ZHANG Dong-hai ZHAO He-liang SHI Yong-hui YU Yong-ge WU Xiang-hui YU Wei KONG 《高等学校化学研究》2008,24(6):767-770
Survivin, a novel member of inhibitor of apoptosis(IAP) protein family, is aberrantly expressed in cancer but undetectable in normal, differentiated adult tissues. The cancer-specific expression of survivin, coupled with its importance in inhibiting cell death and in regulating cell division makes it a useful diagnostic marker of cancer and a potential target for cancer treatment. Survivin cDNA amplified from the total RNA of 293 cells through RT-PCR was cloned into prokaryotic expression vector pRSET-B. The recombinant plasmid pRSET-B-Surv was expressed in E.coli BL21, and the relative molecule mass(Mr) of expressed fusion protein was approximately 21000. The recombinant protein was purified through Ni^2+ affinity chromatography column and characterized by SDS-PAGE and Western blot. The purified recombinant protein was then injected into rabbits, and antisurvivin polyclonal antibody with a high titer was obtained. 相似文献
4.
The entire gene of carboxyltransferase(CT) domain of acetyl-CoA carboxylase(ACCase) from Chinese Spring wheat(CSW) plastid was cloned firstly,and the 2.3 kb gene was inserted into PET28a+ vector and expressed in E.coil in a soluble state.The (His)6 fusion protein was identified by SDS-PAGE and Western blot.The recombinant protein was purified by affinity chromatography,and the calculated molecular mass(Mr) was 88000.The results of the sequence analysis indicate that the cloned gene(GeneBank accession No.EU124675) was a supplement and revision of the reported ACCase CT partial cDNA from Chinese Spring wheat plastid.The recombinant protein will be significant for us to investigate the recognizing mechanism between ACCase and herbicides,and further to screen new herbicides. 相似文献
5.
基因表达数据蕴含着大量的生物信息,在生物基因信息研究中,筛选表达水平发生显著变化的差异基因是认识疾病形成机理和辅助靶点药物研究的关键问题.根据急性髓细胞白血病(AML)的基因表达数据,构造基因均值差序列,建立贝叶斯分层混合模型,并为模型的参数赋予具有基因生物特征的先验信息.采用马尔可夫链蒙特卡洛(MCMC)算法对模型参数进行估计,并筛选出急性髓细胞白血病差异表达基因.在实际数据分析中,从美国生物信息中心(NCBI)的高通量基因表达数据库中获取急性髓细胞白血病基因数据集,从经过非特异滤波预处理的14688个急性髓细胞白血病基因中筛选出711个差异表达基因,差异表达基因数仅占急性髓细胞白血病基因总数的4.84%,这一结果与基因差异表达的生物学原理相吻合. 相似文献
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The entire gene of carboxyltransferase(CT) domain of acetyl-CoA carboxylase(ACCase) from Chinese Spring wheat(CSW) plastid was cloned firstly, and the 2.3 kb gene was inserted into PET28a^+ vector and expressed in E. coil in a soluble state. The (His)6 fusion protein was identified by SDS-PAGE and Western blot. The recombinant protein was purified by affinity chromatography, and the calculated molecular mass(Mr) was 88000. The results of the sequence analysis indicate that the cloned gene(GeneBank accession No. EU124675) was a supplement and revision of the reported ACCase CT partial cDNA from Chinese Spring wheat plastid. The recombinant protein will be significant for us to investigate the recognizing mechanism between ACCase and herbicides, and further to screen new herbicides. 相似文献
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重组家蚕核多角体病毒(rBmNPV)的复制及所载HuIFN-α基因的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
报道了重组家蚕核多角体病毒(BombyxmorinuclearPolyhedrosisVirusBmNPV)在家蚕细胞BmN中复制的细胞病理学变化,除了不形成多角体以外,与野生型病毒相同.研究了病毒感染复数、细胞接种密度和细胞生长阶段对重组病毒复制和α-干扰素(IFN-α)表达量的影响.在一定低感染复数时,α-干扰素的产量较高.对于重组病毒的复制,最适的细胞接种密度为3.6~7.0×105细胞/瓶.在细胞指数生长前期(48~60h)接种重组病毒,对于获得较高的重组病毒复制效价和α-干扰素的产量都是有利的. 相似文献
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用反转录PCR的方法,从BALB/c小鼠脾细胞中扩增出B7-1cDNA后,插入pcDNA3质粒中构建成小鼠B7-1cDNA的真核表达载体pCD-mB7.1,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的B7-1cDNA的序列与文献报道一致.通过脂质体介导将pCD-mB7.1导入B7-1的小鼠黑色素瘤细胞系B16(F0)中,经RT-PCR和RNA斑点杂交初步证实B7-1在肿瘤细胞中获得了稳定有效的表达.同源小鼠脾淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养后采用LDH释放改良法测定淋巴细胞特异杀伤活性,结果显示,与野生型和模拟转染的B16细胞相比,B7-1基因转染的B16细胞能较有效诱导淋巴细胞产生针对野生型B16细胞的特异杀伤活性(p<0.02).这说明,将B7-1基因导入肿瘤细胞表达能提高其免疫原性,诱导有效的抗肿瘤免疫反应 相似文献
10.
根据核苷酸序列分析结果设计引物,通过PCR的方法,在嗜碱芽孢杆菌NTT33的总DNA和p1350中分别扩增到预计大小的片段,证明p1350中的外源DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌NTT33.同时也获得了含有pelA完整ORF的DNA片段.经计算,该基因表达的成熟蛋白质的分子量为34.76×103.构建表达载体pBV220-pel,在E.coliDH5a中进行表达.SDS-PAGE检测发现,表达的蛋白质分子的大小约为35×103,与预测的相符.初步研究其酶学性质发现,该酶在pH9.0~pH10.0,45℃的条件下有较高的活性,而且必需Ca2+参与反应. 相似文献