γH2 AX磷酸化/去磷酸化的分子机制及检测技术进展

自从γH2AX 在1998年首次发现以来，迅速成为多个学科领域的研究热点和研究工具。针对γH2AX建立的多种先进检测方法在生命科学和医学等多个领域内的应用展现了发展潜力。本文从其磷酸化和去磷酸化机制，各种检测分析技术的发展和建立，以及在相关领域里的应用进展等三个方面进行了综述。     

荧光碳点对人血淋巴细胞标记成像

以葡萄糖为碳源,采用溶剂热法合成荧光碳点.用紫外-可见分光光度法和荧光光谱法研究了荧光碳点的发光特性.并将其与鼠抗人CD3抗体、羊抗鼠IgG抗体连接制备两种水溶性复合探针,对人血淋巴细胞进行免疫荧光标记成像.结果表明用该探针对人血淋巴细胞成像清晰,72h后细胞仍然保持明亮的荧光.     

基于点击化学反应的免疫荧光检测方法的建立和应用

本研究介绍了一种新型免疫荧光标记方法及其在细胞荧光检测中的应用技术．首先,合成了两个关键的化合物6-叠氮-己酸琥珀酰亚胺活性酯和4-乙炔基-N-乙基-1,8-萘酰亚胺,并将合成的6-叠氮-己酸琥珀酰亚胺活性酯与抗her2抗体Anti-HP15的游离氨基偶联获得叠氮化IgG,随后通过铜离子催化4-乙炔基-N-乙基-1,8-萘酰亚胺中的炔基与标记抗体的叠氮基团进行点击化学反应,同时以NHS-FITC和NHS-Rhodamine标记的抗体为阳性对照,确认了采用该标记方法的灵敏度,其检测限可达0.1 μg,EC50与阳性对照相当．然后在细胞水平进行染色分析,结果表明,叠氮标记抗体可有效应用于免疫荧光染色分析．最后,采用激光共聚焦三通道复合荧光分析法对不同标记方法及其对应的免疫荧光显色方法进行研究,确认了采用本研究开发的方法标记的抗体可与其他免疫荧光技术同时使用,且结果互不干扰．本研究通过开发一种新型的抗体标记技术,建立了一种新的免疫荧光抗体分析方法,并在细胞水平上进行了应用验证,丰富了免疫荧光抗体检测手段,该方法在未来的免疫研究中具备发展潜力和广泛应用前景．     

谷胱甘肽包被的CdSe/CdS量子点的直接水相制备及其对人血淋巴细胞的标记成像

首次用谷胱甘肽(GSH)作为稳定剂,在水溶液中制备了稳定地发射绿色荧光和橙色荧光的两种 CdSe/CdS核/壳结构的纳米量子点。用紫外-可见分光光度和荧光光谱方法研究了CdSe/CdS量子点的发光特性。透射电镜(TEM)结果表明CdSe/CdS量子点近似球形,在水中分散性良好,比CdSe量子点具有更优异的发光特性,发射光谱和吸收光谱都有红移现象。将CdSe/CdS量子点与鼠抗人CD3抗体连接,制备了水溶性CdSe/CdS-CD3复合物探针,对人血淋巴细胞进行标记和成像。结果表明用该探针对人血淋巴细胞成像清晰,其荧光在30 min的连续蓝光激发下无明显衰退,而FITC荧光在20 min内基本完全猝灭。     

巯基琥珀酸包被的CdTe量子点的制备及其在细胞标记中的应用

以巯基琥珀酸(MSA)作为稳定剂,在水溶液中合成稳定的CdTe纳米量子点,用紫外-可见荧光分光光度和荧光光谱方法研究了CdTe量子点的发光特性.并将其与鼠抗人AFP抗体连接制备水溶性CdTe-AFP复合物探针,对人肝癌细胞进行标记和成像.结果表明所制备的CdTe-AFP复合物探针对人肝癌细胞成像清晰,在生物医学领域具有重要的应用价值.     

基于双光子诱导荧光的肿瘤标志物CA125的实时动态可视化活检

糖链抗原CA125(Ag)是肿瘤早期及癌变期最重要的标识物,该文利用抗CA125单克隆抗体Ab125(Ab)特异性亲合抗原的原理,用制备的双光子荧光标记探针LP标记抗体(LP-Ab)以特异性识别CA125,用近红外激光激发抗原-抗体复合物(LP-Ab·Ag),利用复合物荧光实现对肿瘤标志物CA125的量化检测和实时动态成像。该方法简单易行,克服了单光子荧光检测中的光致毒与光漂白,且能显著提高成像的分辨率、清晰度与灵敏度,对肿瘤及癌变的早期诊断与预防具有重要意义。     

利用免疫荧光法研究大豆种子发育过程中11S和7S蛋白的积累

本文利用免疫荧光法研究了种子发育过程中11S和7S两种球蛋白的积累过程。7S蛋白在子叶的沉积始于开花后15天,11S蛋白的沉积稍迟一些。开花后20—30天,这两种球蛋白增加非常迅速。观察到这两种蛋白或它们的类似物从珠被向子叶转运的趋势。还发现有的品种某些子叶细胞不积累11S蛋白,而在高蛋白品种和高蛋白野生大豆所有子叶细胞都充满11S蛋白和其它贮存物质。     

硅包覆上转换纳米晶制备和表征及生物特异性标记研究

以NaYF₄为代表的上转换纳米晶作为细胞及组织标记的研究越来越热。但易团聚,水溶性、生物兼容性差,没有与生物偶联官能团等缺点限制了其应用,因而表面修饰显得尤为重要。作者通过水热和共沉淀相结合方法,制备了NaYF₄∶Yb3+, Er3+上转换纳米晶,并对其包覆二氧化硅壳层。SEM表征硅包覆前后分别为25和250 nm的单分散粒子,说明硅已成功地包覆于纳米晶表面。980 nm激光照射下,样品的PBS胶体溶液呈可视上转换绿光。上转换荧光光谱和寿命均表明二氧化硅壳层对其发光性质影响很小。圆二色谱说明蛋白分子通过戊二醛与纳米晶偶联前后的二级结构基本不变。基于硅片上的抗原抗体荧光免疫识别试验进一步验证了偶联蛋白分子的特异性,表明该上转换纳米晶适合于生物标记。     

用于糖链抗原CA19-9实时动态活检的免疫双光子荧光标记试剂盒

采用双光子荧光标记探针LP制备了免疫双光子荧光抗体LP-Ab,以特异性识别肿瘤标志物CA19-9(Ag)形成抗原-抗体复合物(LP-Ab·Ag),基于双光子诱导荧光机制用近红外激光(740 nm)激发LP-Ab·Ag,利用LP-Ab·Ag的双光子荧光实现了CA19-9的高清晰度、高灵敏度及高分辨率的量化检测和实时动态成像,并制成用于糖链抗原CA19-9检测的简单便捷的双光子荧光标记试剂盒.