基体辅助激光解吸质谱法测定蛋白质分子量

本文叙述用自行研制成功的激光微探针飞行时间质谱仪及采用基体辅助激光解吸的新方法, 对溶菌酶、细胞色素C、肌红蛋白、胰蛋白酶、蛋白酶、白蛋白等多种蛋白质的分子量进行测定, 并对蛋白质混合物进行分析, 得一以满意的结果。此方法测定蛋白质分子量具有速度快(十分钟一个样品), 准确度高(±1%-0.1%), 灵敏度高(10^-^1^2～10^-^1^5mol)等优点, 是传统生物方法难以比拟的。     

环乙烷中牛胰蛋白酶与正戊胺复合物的晶体结构

丝氨酸蛋白酶是有机溶媒中研究酶促反应的主要对象之一。其中的胰蛋白酶在 生物体内有重要的作用，对其抑制剂如苯甲脒衍生物的研究可应用于治疗很多疾病 。在水溶液中包括正太胺在内的开链脂肪胺类小分子对胰蛋白酶的抑制能力有限， 不能生成复合物。我们对浸泡在含有正戊胺的环已烷中的β-牛胰蛋白酶的晶体结 构进行了测定，分辨率为0.2 nm，并与水相中同样处理的晶体作了比较。结果表明 ，正戊胺于环已烷中和β-牛胰蛋白酶有强结合作用，一个戊胺分子结合到酶活性 中心；另一个结合在β-牛胰蛋白酶的表面，与也被结合的硫酸根形成氢键。此X射 线蛋白质晶体结构分析提供了一个例子，在有机溶剂中可用弱抑制剂的探针小分子 研究其和蛋白的结合情况，以及描绘蛋白质表面的结合位点。这些研究可以为搜索 弱抑制剂提供有用的结构信息。     

表面活性剂双水相的性质及其应用 Ⅱ: 表面活性剂双水相在生物活性物质中的应用

测定了胰蛋白酶在表面活性剂双水相中的分配比, 检测了分配在双水相中酶的活力及构象变化, 并与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)、阳离子表面活性剂溴化十二烷基三乙铵(C12NE)对酶活性及构象的影响进行了对照。结果表明, SDS对蛋白质的变性明显强于C12NE。阳离子表面活性剂过量的双水相体系, 简称阳离子双水相, 其中的SDS与C12NE由于库仑引力和疏水相互作用力,便得SDS较难被胰蛋白酶吸附, 胰蛋白酶在阳离子双水相中的活性没有丧失。其构象亦未发生显著变化。     

电喷雾电离质谱测定细胞色素b5及其定点突变蛋白

本文利用电喷雾电离质谱技术对胰蛋白酶酶解的细胞色素b5蛋白Tb5及脂肪酶酶解的细胞色素b5蛋白Lb5及它们的定点突变蛋白共八个样品的分子量进行精确测定, 证实定点突变的试验是成功的。     

无机盐水合物对有机溶剂中酶促寡肽合成的影响

必需水的存在是酶在有机溶剂中保持活性的关键。本文研究了自由水初始水含量对有机溶剂中α－胰凝乳蛋白酶(α-chymotrypsin)和嗜热杆菌蛋白酶粗品(thermoase)催化合成寡肽的影响。用无机盐水合物Na2SO4·10H2O和Na2CO3·10H2O代替自由水重复了上述反应。实验表明,足量的无盐水合物能在有机溶剂中可逆地失去自射所带的结晶水,因而能代替自由水来提代酶所需的"必需水",并有效地控制有机溶剂中酶促反应体系的水活度(αw)值,从而有利于肽键的形成。