纳米通道单分子检测P53蛋白与DNA的弱相互作用

利用基于α-溶血素(α-HL)的纳米通道单分子检测技术在单分子水平上探测位于肿瘤抑制蛋白P53 DNA结合域的多肽分子(P53-P)与含有p21^waf1/cip1基因结合域的双链DNA (B40)之间弱相互作用. 在电场力的作用下, 单个P53-P/B40复合物被α-HL纳米通道捕获并限制在其前庭中. 通过空间限域作用, P53-P与B40之间的弱相互作用被放大为具有显著电压依赖性的复合物-α-HL间强烈的相互作用, 从而产生极易分辨的离子流特征阻断信号. 统计分析特征阻断信号显示P53-P与B40之间的弱相互作用使得B40产生微小的构型变化. 分子对接模拟进一步证明, P53-P能够插入B40的小沟并使得小沟间距变窄. 因此, 基于α-HL的纳米通道单分子检测技术可以作为研究单个生物大分子间弱相互作用的超灵敏分析方法.     

Single‐Molecule Determination of the Isomers of d‐Glucose and d‐Fructose that Bind to Boronic Acids

Monosaccharides, such as d ‐glucose and d ‐fructose, exist in aqueous solution as an equilibrium mixture of cyclic isomers and can be detected with boronic acids by the reversible formation of boronate esters. The engineering of accurate, discriminating and continuous monitoring devices relies on knowledge of which cyclic isomer of a sugar binds to a boronic acid receptor. Herein, by monitoring fluctuations in ionic current, we show that an engineered α‐hemolysin (αHL) nanopore modified with a boronic acid reacts reversibly with d ‐glucose as the pyranose isomer (α‐d ‐glucopyranose) and d ‐fructose as either the furanose (β‐d ‐fructofuranose) or the pyranose (β‐d ‐fructopyranose). Both of these binding modes contradict current binding models. With this knowledge, we distinguished the individual sugars in a mixture of d ‐maltose, d ‐glucose, and d ‐fructose.     

纳米孔道单分子检测结直肠癌MicroRNAs

MicroRNA（miRNA）可用于癌症的早期诊断、预后判断,其分析检测具有重要临床意义.结直肠癌的发生、发展与miRNA 21、miRNA 92等的异常表达明显相关.本研究设计了以poly（dT）_n为引导链的DNA探针（probe）并尝试使用α-溶血素（α-HL）纳米孔道单分子检测方法检测结直肠癌miRNAs.miRNA·probe复合物分子穿过α-HL纳米孔道限域空间时,由于probe链长、序列不同导致probe-α-HL相互作用不同,miRNA 92·probe 92、miRNA 21·probe 21、miRNA 16·probe 16输出为形态、阻断时间不同的多台阶特征信号,实现了三种miRNAs的有效区分.实验证明,此方法可以用于检测血清实际样品.因此,未来有望使用α-HL构建miRNA超灵敏单分子生物传感器.