基于溶胶-凝胶技术可更新的安培分析免疫传感器用于人血清中补体3的测定

在低温下，通过混合石墨粉，补体3抗血清，溶胶－凝胶而制备了一种基于啼－凝胶技术的可更新的安培分析免疫传感器。该传感器坚固，多孔，拥有一个更新的表面，在辣根过氧化物酶标记的补体3的协助下，通过竞争性的免疫分析来确定人血清中补体3的含量。以邻－氨酚作为底物，－150mV作为工作电位，响应电流与补体3的浓度在1．17－35．1μg/mL范围内呈线性关系，检出限为0．56μg/mL。分析血清样本结果表明所制备的传感器在临床分析中是可行的。     

补体C1q压电免疫传感器的研究

研制了一种可重复使用的压电免疫传感器用于检测补体C1q.比较了聚乙烯亚胺粘附、戊二醛交联法,物理吸附法以及蛋白A法三种固定化抗体蛋白的方法.使用蛋白A法,补体C1q在所测浓度范围内有良好的线性关系.使用过的晶片用0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲溶液(pH 3.0)解吸,可重复使用4次.     

纳米金聚集复合物放大的计时电位法测定补体C3

报道了一种用金标复合物放大的计时电位法测定补体C3的电化学免疫检测方法.对影响传感器响应的因素如蛋白A固定浓度、抗体包被过程的pH及浓度、金标物混合比等进行了考察.在优化的实验条件下,传感器的信号响应和补体C3的浓度在0.12～117.3 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检出限达0.02 ng/mL.     

纳米金聚集复合物放大的计时电位法测定补体C3

报道了一种用金标复合物放大的计时电位法测定补体C₃的电化学免疫检测方法. 对影响传感器响应的因素如蛋白A固定浓度、抗体包被过程的pH及浓度、金标物混合比等进行了考察. 在优化的实验条件下, 传感器的信号响应和补体C₃的浓度在0.12～117.3 ng/mL范围内具有良好的线性关系, 检出限达0.02 ng/mL.     

禹州漏芦均一多糖的结构分析及其硫酸化衍生物的抗补体活性

以禹州漏芦为原料,经沸水提取、乙醇沉淀、DEAE-Cellulose和SuperdexTM75凝胶柱层析分离纯化,得到一种水溶性的酸性均一多糖(EPS-2A).采用单糖组成、甲基化及绝对构型等方法对其进行了结构解析.结果表明,该均一多糖主要由D-半乳糖醛酸组成,并含有少量的Rha和Ara.该均一多糖经不同条件硫酸衍生化后的衍生物(Sul-2A-1和Sul-2A-2)与阳性药肝素[CH50=(103.0±9.0)μg/mL(mean±SD,n=3),CH50为出现50%溶血时的样品浓度]相比,均表现出很强的抗补体活性[Sul-2A-1的CH50=(74.1±4.6)μg/mL;Sul-2A-2的CH50=(35.7±2.8)μg/mL].     

补体4的免疫共振散射光谱分析

在pH 7.3 Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液中及聚乙二醇-6000存在下,补体4(C4)与羊抗人补体4(goat anti-human C4)通过库力引力、范德华力、氢键结合力、疏水等作用力发生免疫反应,可聚集形成疏水的免疫复合物微粒,该微粒在350,390,440 nm有3个共振散射峰。激光散射法测得免疫复合物微粒的平均粒径为3 440.0 nm。分别研究了pH、羊抗人补体4和PEG浓度、温育时间和温度、共存物质的影响。在最佳条件下,补体4(C4)浓度在0.18～2.60 μg·mL-1范围内与350,390 nm处的散射强度均呈线性关系,其回归方程、相关系数、检出限分别为ΔI_{350 nm}=28.23c+9.17,ΔI_{390 nm}=31.36c+11.08, 0.993 9,0.992 3, 0.084 μg·mL-1,0.11 μg·mL-1。该法用于分析人血清中补体4(C4),结果与免疫透射比浊法结果一致,相对标准偏差在1.88%～4.36％,具有简便快速、灵敏度高、选择性好等特点,在临床检验上具有一定的应用价值。     

关白附中1,6-葡聚糖及其硫酸酯的抗补体活性

为研究关白附多糖及其硫酸酯的经典途径抗补体活性, 以关白附[Aconitum coreanum(Lévl.) Raipaics]为原料, 经水提醇沉、 DE-32、 Superdex-200和Superdex-75凝胶柱分离纯化, 得到1个均一的中性多糖KMPS-2A. 采用高效凝胶渗透色谱法、 甲基化、 核磁共振和红外光谱等手段对KMPS-2A的结构进行了鉴定; 采用氯磺酸吡啶法制备了多糖硫酸酯, 并测定了多糖及硫酸酯的抗补体活性. 结果表明, KMPS-2A的平均相对分子量为6.76×10⁵, 结构为α-1,6-D-Glc链接的线性多糖; 在氯磺酸与吡啶的体积比为1.75∶1.0时制备的多糖硫酸酯1.75B的取代度最高为1.79. 碳核磁谱分析结果表明, 硫酸基团先后取代C2, C3及C4位. 该多糖硫酸酯的抗补体活性与其硫酸基团取代度呈现一定的相关性, 多糖硫酸酯1.75B的经典途径抗补体活性优于阳性对照药肝素, 表明其具有开发成为补体抑制剂的潜力.     

基于巯基自组装单层膜技术的补体C3压电免疫传感器的研究

本文采用自组装单层膜(SAMs)技术在压电石英晶振金电极表面组装巯基丙酸SAMs,以盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作偶联剂共价固定补体C3抗体,研制了一种检测人血清中补体C3成分的压电免疫传感器。研究了巯基丙酸的自组装和抗体的固定化条件,考察了晶振固定抗体后的液相振荡行为和检测特性。并利用压电传感装置的实时监测功能,研究了巯基丙酸在金电极表面的自组装成膜过程和补体C3免疫反应动力学,获得了重要的动力学依据和参数。传感器检测补体C3的线性范围为2．34～23．2μg／mL。将传感器用于临床样品的检测,所得结果与酶联免疫吸附法基本一致。     

极谱免疫法测定人血清补体活性的研究

提出一种极谱免疫法测定人血清补体活性的新方法，利用补体作用下的免疫溶血反应释放出的具有拟过氧化物酶活性的血红蛋白，催化邻苯二胺和Ｈ２Ｏ２的反应，通过酶促产物２，２′－二氨基偶氮苯的极谱检测来确定补体的活性。测定范围为０．１０－１．００ＣＨ５０ｕｎｉｔ／ｍＬ，检出限为０．０８ＣＨ５０ｕｎｉｔ／ｍＬ。灵敏度比分光光度法高１０倍，一次可分析２５份血样，已用于正常人和病人血清中补体活性的测定。     

补体1q压电免疫传感器的研究

研制了一种可重复使用的压电免疫传感器用于检测被测体Ｃ１ｑ。比较了聚乙烯亚胺粘附，戊二醛交联法，物理吸附法以及蛋白Ａ法三种固定化抗体蛋白的方法。使用蛋白Ａ法，补体Ｃ１ｑ在所测浓度范围内有良好的线性关系。使用过的晶片用０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸盐缓冲溶液解吸，可重复使用４次。