基于探针底物法的高效液相色谱-串联质谱法测定蚯蚓体内4种CYP同工酶活力及其应用北大核心CSCD

基于探针底物法,将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素(50μmol·L^(-1))、安非他酮(25μmol·L^(-1))、阿莫地喹(50μmol·L^(-1))、右美沙芬(5μmol·L^(-1))的孵育体系中(微粒体蛋白质量浓度需控制在32~96 mg·L^(-1)内),于37℃孵育20 min后,加入甲醇终止反应,静置10 min后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量。根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8及CYP2D6酶活力。采用Acquity UPLC HSS T3柱作为分离柱,以不同体积比的含1 mmol·L^(-1)乙酸铵的0.05%(φ)甲酸溶液和甲醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱,串联质谱中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式检测,并用基质匹配法配制混合标准溶液系列。结果显示:7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的质量浓度均在2.5~50μg·L^(-1)内与其对应的峰面积呈线性关系;对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为73.7%~103%,日内相对标准偏差(RSDs,n=5)为2.1%~11%,日间RSDs(n=5)为4.6%~10%。方法用于分析分别暴露于多壁碳纳米管染毒土壤(暴露组)和普通土壤(对照组)21 d后蚯蚓体内4种CYP同工酶的活力,CYP2C8酶活力明显高于CYP2A6、CYP2B6及CYP2D6,暴露组中CYP2A6及CYP2C8酶活力显著(P<0.05)高于对照组,而CYP2B6及CYP2D6酶活力与对照组的无显著性差异,因此推测可将CYP2A6及CYP2C8作为一套生物标记物,用于定性诊断土壤的多壁碳纳米管污染。     

蚯蚓对土壤中8:2与10:2氟调醇的生物富集与转化

以蚯蚓(Eisenia fetida)为受试生物,研究了8:2和10:2氟调醇(FTOH)在蚯蚓体内的生物富集特性、清除速率和生物转化等.结果表明,全氟辛酸(PFOA)是8:2 FTOH主要的末端降解产物,全氟癸酸(PFDA)是10:2 FTOH主要的末端降解产物.暴露30 d后,蚯蚓体内的全氟化合物浓度达到最高,分别为PFDA(565 ng/g)8:2 FTOH(505 ng/g)PFOA(179 ng/g)10:2 FTOH(148 ng/g).清除阶段8:2 FTOH,10:2 FTOH,PFOA和PFDA半衰期(t1/2)分别为23.1 d,16.5 d,5.8 d和11.4 d,其对应的清除速率常数(ke)分别为0.03/d,0.042/d,0.12/d,0.061/d,说明长碳链的PFCAs更难从生物体内清除,母体化合物FTOHs在蚯蚓体内的持久性更强.     

火焰原子吸收光谱法测定蚯蚓中铜、锌、镉和铅

随着工业生产的发展和人们生活水平的不断提高,城市垃圾处理场的重金属含量越来越高。部分重金属通过大气和水进入土壤,由于污染给生物和人类带来危害。大型土壤动物-蚯蚓,是土壤污染中敏感的指示动物,受到国内外学者的重视。因此,通过对蚯蚓的监测来评价土壤的污染程度是常用的方法之一。本法将蚯蚓洗净泥沙,置黑暗处饥饿养殖3天,待其基本排尽粪便,经烘干研磨制成粉,经硝酸-高氯酸消解后,用火焰原子吸收光谱法测定其中的铜锌镉铅含量。方法简便、快速,相对标准偏差为0．5％～3．7％,加标回收率为94．0％～106．0％,获得满意的结果。     

蚯蚓诱导-黑麦草吸收土壤Cd的相关性研究

利用石墨炉(GF-990)原子吸收法,对蚯蚓诱导条件下黑麦草对土壤Cd吸收规律进行了研究.结果表明:(1)在3～6 mg·kg-1的Cd浓度范围内,黑麦草地下部分Cd含量与蚯蚓数量呈极显著正相关(γ=0.8832*～0.9862**),黑麦草地上部分Cd含量与蚯蚓数量的正相关性不显著(γ=0.3455～0.325 4);而土壤Cd含最与蚯蚓数量之间呈显著的负相关性(r=-0.5887～-0.6784*).(2)在相等数最的蚯蚓条件下,随着土壤中Cd浓度增加,黑麦草地上、地下部分Cd的含量均升高.(3)在相同的土壤环境下,蚯蚓数量与蚯蚓体内Cd含量呈极显著负相关(r=-0.982 0**～-0.9916**).     

关于“磁场空间分布的新概念”一文的说明

 《现代物理知识》一九八九年第三期发表了“磁场空间分布的新概念”一文后,收到了一些学者来信,提出了一些问题.我就有些问题作一个初步的说明.至今为止,所有的教科书中都是把一个条形磁铁和地球外部的磁场看作是沿一个方向分布的,磁能量从S极流向N极,对生命系统的作用具有同一倾向.现有的测量和实验记录到的资料表明,这个概念有误.美国国家空间管理部门对地球外磁场空间分布的测量记录,发现地球象一块条形磁块,具有磁性赤道(磁场等于零),分开两个不同的磁能区(正能区和负能区--正能指发射能量,负能指吸收能量),磁能从S极离开,进入地球表面,然后逐步改变它的方向.     

蚯蚓蠕动过程中非光滑波纹形体表的力学分析

蚯蚓体表的形状是蚯蚓适应其生存环境和自然进化的结果．用力学分析方法，解释蚯蚓的多体节非光滑形态在其运动过程中所表现出的省力、节省能量的特性．计算结果表明具有波纹形表面的蚯蚓在蠕动过程中可以节省1．12%的纵向肌肉的收缩力，在运动过程中所消耗的能量也可以节省1％左右．     

原子吸收法测定污泥蚯蚓中的镉、铜、铬、锌、铅

研究用原子吸收法测定蚯蚓中的镉、铜、铬、锌、铅.将制备成粉状的蚯蚓用硝酸-高氯酸消解,在仪器工作条件下,金属离子含量与吸光度呈良好的线性关系.测定结果的相时标准偏差为1.3%～3.5%(n=7),加标回收率为93%～107%.测定镉、铜、铬、锌、铅离子的线性范围、线性相关系数、检出限依次为0～0.9 mg/L,r=0.9984,0.0r7 mg/L;0～10 mg/L,r=0.9989,0.05 mg/L;0～5 mg/L,r=0.999 1,0.13mg/L;0～0.7 mg/L,r=0.9997,0.02 mg/L;0～7.5 mg/L,r=0.9994,0.3 mg/L.     

蚯蚓抗菌物质的诱导

初步研究了超声波诱导后蚯蚓血淋巴中抗菌物质的产生规律及抗菌活性。结果表明：最佳诱导时间为3．5min;抑菌作用最强出现在诱导后72h;在几种供试菌中,血淋巴对枯草芽孢杆菌抑菌作用最强。     

琼脂糖凝胶CL-6B亲和色谱法一步纯化蚯蚓半乳凝素

环节动物的S型凝集素在结构和生化性质上都有别于一般的S型凝集素,其在抗癌等研究方面的潜在价值重大。根据环节动物S型凝集素的性质,采用惰性分子筛填料Sepharose CL-6B（琼脂糖凝胶CL-6B）作为亲和色谱介质对蚯蚓S型凝集素进行了纯化。以2 mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）-MEPBS (4 mmol/L β-巯基乙醇,150 mmol/L NaCl,20 mmol/L 磷酸盐,pH 7.2)溶液作为平衡液,以氨水(150 mmol/L,pH 10.5)作为洗脱液得到的蛋白质经SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）、凝血实验及荧光检测等证明了其即为蚯蚓S型凝集素。该方法只需一个步骤即可从蚯蚓提取液中分离到纯的S型凝集素,比传统方法更加快捷高效,优越性明显。该方法的应用将有利于对环节动物S型凝集素的深入研究。