中性盐对谷氨酸脱羧酶活性的影响机制

通过不同阳离子和不同阴离子对唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivariussub sp.thermophilus)谷氨酸脱羧酶活性的影响以及NaNO3对不同蛋白质浓度的谷氨酸脱羧酶活性的影响进行考察,结果表明:中性盐对谷氨酸脱羧酶活性的影响不是由于增加蛋白质亚基间的疏水作用引起的,而可能是由中性盐对谷氨酸脱羧酶活性的弱抑制作用与中性盐增加了谷氨酸脱羧酶的胶体体系稳定性共同作用所致,同时还可能与中性盐降低了反应体系CO2的溶解度有关.     

2,4-二硝基氟苯柱前衍生法测定植物中谷氨酸脱羧酶的活力

建立了2,4-二硝基氟苯(FDNB)柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定植物中谷氨酸脱羧酶(GAD)活力的方法.利用GAD催化L-谷氨酸脱羧转变成γ-氨基丁酸(CABA)的性质,用FDNB柱前衍生GABA,HPLC Lichrospher C18色谱柱分离,在360 nm下检测衍生物,从而得到生成GABA的含量,及不同植物组织中的GAD活力.本方法的线性范围0.2～5 g/L GABA(r=0.9954),精密度RSD为0.21%、回收率高,且衍生化产物在一个月内都能保持稳定.用本方法测定得出稻米和茶叶中均有一定的GAD活力.在稻米组织中,GAD主要分布在米胚芽中,米糠也具有相对较高的GAD活性,为开发富含GABA的糙米食品提供了依据.     

高效液相色谱法测定发鼠脑谷氨酸脱羧酶活性

应用高效液相色谱－电化学检测技术建立了鼠脑谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）活性的测定方法。方法快速，灵敏。总分析时间９ｍｉｎ。γ－氨基丁酸的最低柱上检测限为５０ｆｍｏｌ。天内及天间相对标准差分别小于４．３％和９．８％。测得ＧＡＤ最大催化速度为０．７２３ｎｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍｇ蛋白。讨论了最佳衍生化ｐＨ及色谱条件。     

介导GAD基因的人泡沫病毒载体的构建及其应用

构建了两种新的重组人泡沫病毒载体pGPSNI—hGAD67和pGPSNI—hGAD65，分别携带人符氨酸脱羧酶（GAD）的两种同工酶GAD65和GAD67基因，并研究其在帕金森病（PD）模刭鼠丘脑底核中的表达及对帕金森病的治疗作用．RT—PCR结果表明，人泡沫病毒载体成功地介导了GAD65基因和GAD67基因在PD模型鼠丘脑底核中有效表达．动物行为检测表明，GAD65基因导入组PD模型鼠行为与对照组相比得到明显的改善（n=12，由〈0．01）．     

脂肪酸光脱羧酶及其在有机合成中应用的研究进展

生物基脂肪酸是极具应用潜力的可再生资源。以绿色、低碳的方式对生物基脂肪酸进行转化合成高价值的化学品和燃料可满足现代社会可持续发展的迫切需要,也符合绿色生物制造的需求。生物催化因反应条件温和、选择性高等特点受到众多学者的广泛关注,其中,近年来新发现的由可见光驱动的脂肪酸光脱羧酶（fatty acid photodecarboxyase, CvFAP）可催化不同链长的脂肪酸进行脱羧反应用来合成燃料和化学品,反应过程具有极高原子经济性,在绿色催化工艺及能源领域具有广阔的应用前景。本综述旨在对脂肪酸光脱羧酶（CvFAP）的最新研究进展进行总结分析,并对脂肪酸光脱羧酶的发展趋势进行展望,以期为脂肪酸光脱羧酶（CvFAP）在绿色合成领域的进一步开发利用提供参考。     

高效液相色谱法测定血清中的鸟氨酸脱羧酶活性

建立了血清中鸟氨酸脱羧酶活性的高效液相色谱测定法。结果表明，腐胺在２．８～４５．５μｍｏｌ／Ｌ范围内线性关系良好。最低检测量为０．０５ｎｍｏｌ，回收率为８５．０６％，ＲＳＤ为８．９１％。本法测定正常人及乳腺癌、宫颈癌患者血清中的鸟氨酸脱羧、酶活性发现，乳腺癌及宫颈癌血清中的酶活性升高（ｐ＜０．０５），说明测定血清的鸟氨酸脱羧酶活性，对诊断肿瘤有一定的临床意义。     

量子力学和分子力学组合方法及其应用

QM/MM组合方法在研究凝聚态中的化学反应及生物大分子的结构和活性之间的关系等方面已取得重要进展。这一方法的要点在于将大体系配分成几部分,根据需要对不同部分进行不同级别的处理,因此既利用了量子力学的精确性,又利用了分子力学的高效性。对QM/MM组合理论及其一些最新进展作一简单介绍,并以最近进行了几个工作为例说明QM、MM组合方法的应用。     

固定化谷氨酸脱羧酶柱式反应器测定L—谷氨酸

用羧甲基化的Ｎ,Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡萄糖（简称ＣＭ－ＣＡＤＢ）凝胶树脂为新型载体,研究了谷氨酸脱羧酶（ＧＤＣ）在ＣＭ－ＣＡＤＢ上的固定化与环境的依赖头等确定了酶固定化最佳条件,研究了固定化ＧＤＣ的性状与底物浓度,ｐＨ温度的依存性,动态响应特性,热稳定性的寿命,求算了米氏常数。将固定化ＧＤＣ酶柱与进样系统具ＣＯ２气敏电极的离子活度分析器－计算机数据采集系统匹配,构成酶反应谷氨酸检测装置     

L-赖氨酸双酶电极的研制及应用

用交联法将赖氨酸脱羧酶与碳酸酐酶共同固定于CO_2电极透气膜上,制成L-赖氨酸双酶电极,讨论了该双酶电极的响应特性。用双酶电极测定了金针菇和强化赖氨酸食品中赖氨酸含量,与氨基酸自动分析仪所得结果一致。     

绿藻来源光脱羧酶McFAP的挖掘及其中短链脂肪酸选择性脱羧机制研究（英文）

利用脂肪酸脱羧制备烃类生物燃料是开发可再生能源的有效途径.相比于传统化学法,生物酶法具备高效、能耗低及环境友好等优势,更具有工业应用前景.光脱羧酶(FAP)是一类专一性强,催化效率高,催化过程无需额外添加昂贵辅因子,仅需利用蓝光即可将脂肪酸转化为烷(烯)烃的光驱动酶,在烃类生物燃料的高效可持续生物合成领域具有应用潜力.目前已报道的有偏好催化C12-C20链长脂肪酸的光脱羧酶,但其底物选择性机制尚未被深入探究.本文挖掘了来源于绿藻Micractinium conductrix的光脱羧酶Mc FAP,并开展了异源表达及制备、酶学性质表征、催化特性及底物选择性机制等研究.利用全基因合成技术获得了来源于绿藻Micractiniumconductrix假定的光脱羧酶基因序列mcfap,同时构建了N端缺失突变体Mc FAP-S (缺失1-550位氨基酸).在大肠杆菌中实现了Mc FAP-S的异源表达.重组的Mc FAP-S对链长为6-18的饱和直链脂肪酸均有脱羧活性,偏好中链脂肪酸,最适底物为正辛酸(C8:0)(转化率>99%).相同条件下, Mc FAP全细胞催化软脂酸(C16:0)脱羧的...